UE细菌基因组DNA小量提取试剂盒

UE细菌基因组DNA小量提取试剂盒
产品概述：
储存条件
RNase A: 50 mg/ml, 室温贮存6个月；长期贮存于-20℃。
溶菌酶：50%甘油溶解溶菌酶，使溶菌酶浓度为50 mg/ml,-20℃密闭贮存。
Buffer S: 细菌原生质制备液，加入RNase A后，4℃密闭贮存。
0.25M EDTA: 室温密闭贮存。
Buffer G-A: 裂解液，室温密闭贮存。
Buffer G-B: 蛋白去除液，室温密闭贮存。
Buffer DV-A: Buffer DV的制备液（请参照实验准备Buffer DV的配制方法配制），室温密闭贮存。
Buffer DV: 相分离液，室温密闭贮存。
Buffer BV: DNA结合液，室温密闭贮存。
Buffer W1: 洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate: 去盐液。使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇）并混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent: 2.5 mM Tris-HCI, pH 8.5,室温密闭贮存。



流程图


常见问题解答：

◆洗脱产物的DNA量很少或没有
·样品量过多，使试剂处理能力不够。
·裂解不充分
溶菌酶失活（-20℃可放6个月）
溶菌酶作用时间不够
·吸取下相时有上相的物质污染
·buffer W2中未加无水乙醇或者使用了低浓度的乙醇代替了无水乙醇。
·DNA洗脱效率不高
最后一次buffer W2洗涤完后不要将制备管放于负压装置上抽的过干。

◆A260/280比值过低
·样品量过多
·细菌裂解不完全
·吸取下相时有中相层物质污染

◆RNA污染 (A260/280比值偏高)
·未将RNase A加入到buffer S中
·RNase A失活或者酶量不够

◆基因组DNA有降解
完全降解的基因组DNA在凝胶电泳上会出现模糊的条带或者是拖尾现象。
·菌液不新鲜，细胞凋亡导致DNA降解
·操作过于剧烈导致DNA被机械打断
·未能有效抑制内源核酸酶作用
溶菌酶裂解时间过长，没有及时加入EDTA并且低温操作。

◆基因组DNA酶反应效果不佳
·DNA纯度低
样品过多导致裂解不充分，从而引起大量蛋白、多糖、脂类等杂质残留，影响后续酶切反应效果。可适当减少样品初始量。
·盐分污染：可以用2× Buffer W2进行洗涤
·乙醇污染：在最后一次Buffer W2洗涤后可将制备管由原来离心1min 增加至离心2min

◆滤器或者制备管堵孔
·样品过多
·裂解不充分