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- CS0023
- 2025年10月01日
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大量
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上海研卉
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100ml
分离完整的细胞核
密度梯度离心是利用特定的介质形成连续或不连续的密度梯度后，将组织匀浆液或细胞悬液置于介质顶部，通过离心力或重力作用使细胞或细胞器逐级分离开来。Ficoll 400又称聚蔗糖400，分子量40KD，具有无毒、低渗透压、密度高等特性，容易使细胞聚集，是分离细胞或细胞器较好的介质。
Leagene Ficoll 400裂解液主要用于分级梯度分离细胞器如完整细胞核等，主要由PM缓冲液、Ficoll 400、蛋白酶抑制剂等组成，经过滤除菌。根据梯度不同，Ficoll 400含量分别为20%～50%不等。
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文献和实验Ficoll密度梯度离心法提取PBMC原理及注意事项 外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC），是指外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞（Lymphocyte）、单核细胞（Monocyte）、树突状细胞（DC）和其他少量细胞。PBMC 可利用健康人或动物供体的外周血，通过 Ficoll 密度梯度离心，磁珠分选等步骤获得，主要包括淋巴细胞和单核细胞。 Ficoll 是蔗糖的多聚体，中性，平均分子量 400,000，当密度为 1.2
1. 溶液准备 2×样品缓冲液：130mM Tris-HCl （ pH8.0 ） , 20% （ v/v ） 甘油 , 4.6% （ w/v ） SDS , 0.02% 溴酚蓝 ,2%DTTPBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4 ，50mM NaCl，2.7mM KClRIPA缓冲液：50mM Tris-HCl（pH7.4），150mM NaCl，1mM EDTA，1%Triton×100 ，1%去氧胆酸钠，0.1%SDS，1mM PMSF，1μg
g 4% CHAPS 0.4 g 0.5mM EDTA 0.00146 g 40Mm Tris 0.0485 g 2%(v/v) NP-40 0.2 ml 1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml 5mM PMSF用前加 0.00871 g 2%pharmalyte 0.2ml 共10ml分装成400µl/每管(可应用于30-80毫克组织裂解) 注：已配好分装成400µl
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