IgG Fab切割酶

特别提示：包括IgG Fab切割酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：IgG Fab切割酶
英文名称：FabCutter I Protease
产品货号：JN0166
产品规格：1000U|5000U

  本酶为一种新型的高特异性高活性Fab切割酶，通过大肠杆菌表达，经多步纯化获得。该酶能对人、鼠、绵羊、山羊等物种不同亚型的免疫球蛋白IgGs进行快速单位点酶切。该酶的酶切位点位于免疫球蛋白IgG铰链区的上方，酶切产物为Fab片段和二聚体Fc片段。与木瓜蛋白酶，无花果蛋白酶，胃蛋白酶等相比，FabCutter I Protease具有酶切位点单一，切割快速等优点。
FabCutter酶切体系缓冲液的zuì适pH值为6.5-8.0（表一），zuì适反应温度为37℃，另外该酶发挥活性需要还原剂（表二）。

活性定义：在10 mM Tris, 150 mM NaCl,2mM DTT,pH 7.4的反应体系内，37℃反应1小时，一个单位的酶能将1μg的人源IgG切割95%以上。

应用实例：

One unit cleaves≥95% of 1μg human IgG1 when incubated in 10 mM Tris,150 mM NaCl,2mM DTT,pH 7.4 at 37℃ for 1 hour as monitored by SDS-PAGE.
1: Human IgG；2: Human IgG cleaved by FabCutter I；M: Protein Marker；

表一：可供选择的反应缓冲液及pH

兼容 Buffers	pH
PBS	6.5-8.0
Tris Buffer	7.0-8.0
Sodium Acetate Buffer	6.5*

*pH在6.5以下要增加酶的用量。

表二：可供选择的还原剂

还原剂	浓度(mM)	pH值
DTT	1-5	6.5-8.0
TCEP	1-5	6.5-8.0
Cysteine	50-100	6.5-8.0
Cysteamine	50-100	6.5-8.0
Mercaptoethanol	50-100	6.5-8.0

溶解方法：
1、溶解前低速离心，使冻干粉末聚集于管底。
2、用无菌ddH2O溶解，1000U酶加入20μl无菌ddH2O，5000U酶加入100μl无菌ddH2O，配制成酶活性为50U/μl的溶液。
3、低速离心，使溶液汇聚于管底。

操作方法：
1、按照溶解说明将冻干粉溶解，配制成为50U/μL的溶液。
2、待酶切的抗体溶解在反应缓冲液里，建议浓度为0.5-10mg/ml。
3、按照1U酶切1μg IgG的量将酶加到反应缓冲液里，加入还原剂激活酶的切割反应，通常在中性pH条件下加入1-5Mm DTT或者TCEP。
4、37℃酶切1个小时，取部分样品跑SDS-PAGE检测切割效果。
注：可使用本品中的Human IgG抗体做为底物测试酶切效果，用70μl ddH2O配制成1mg/ml的蛋白溶解，取50μl加入1μl的酶。酶切前后取样跑SDS-PAGE。

储存条件：-20℃。

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