热敏磷酸酶(AP)

特别提示：包括热敏磷酸酶(AP) 在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：热敏磷酸酶(AP)
英文名称：Heat sensitive phosphatase (AP)
产品货号：SV1063
产品规格：5KU|1KU|500U

特性:
DNA 和 RNA 的去磷酸化
防止克隆载体的自连
制备 5´ 末端标记模板
去除 PCR 产物中的 dNTP 和焦磷酸盐
概述:
热敏磷酸酶催化 DNA 和 RNA 5´ 和 3´ 磷酸单脂的去磷酸化反应。另外，热敏磷酸酶水解核糖和脱氧核糖核苷三磷酸（NTP 和 dNTP）。热敏磷酸酶在分子生物学研究中应用广泛，如去除 DNA 和 RNA 末端的磷酸基团，用于后续的克隆和探针末端标记。在克隆中，对线性载体去磷酸化，防止自连。该酶可以作用于 5´ 突出端、凹陷端和平末端。热敏磷酸酶也可以用来降解 PCR 反应中的游离 dNTP，用于制备测序模板和 SNP 分析。热敏磷酸酶 在 70℃ 温育 5 分钟即可完全的、不可逆的失活，因此，在连接或末端标记之前，可以不用去除热敏磷酸酶。
来源:
克隆有 TAB5 AP 基因的 E. coli 菌株，该基因最初克隆于质粒 pNI 中，后来重新克隆于质粒 pEGTAB7-4.1 中。
反应条件:
1X 热敏磷酸酶反应缓冲液
[50 mM Bis Tris-丙* HCl，1 mM MgCl2，0.1 mM ZnCl2（pH 6.0 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活:70℃ 加热 5 分钟。
质保声明:
热敏磷酸酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
单位定义:
1 单位指在 37℃ 条件下，30 分钟能使 1 μg 经 HindIII（产生 5´ 突出末端）、EcoRV（产生平齐末端）或 PstI（产生 5´ 凹陷末端）消化的 pUC19 DNA 去磷酸化所需的酶量。去磷酸化标准是指在自连接反应中能抑制 ＞ 95% 的 DNA 再环化（通过转化 E. coli 细胞来检测）。
浓度:
5,000 units/ml。

除了热敏磷酸酶(AP) ,，我公司还供应以下相关产品：



名称：MMLV逆转录酶
货号：BTN60905
规格：10000U
该酶是突变型的MMLV逆转录DNA聚合酶，从表达莫洛尼氏鼠白血病病毒reverse transcriptase基因(pol基因)的E.coli细胞中分离纯化而得，由一个分子量为76.1KDa的单亚基组成，可催化以单链DNA、RNA或DNA:RNA杂交链为模板的互补DNA链的聚合反应。跟野生型相比,它没有RNase H活性。

产品特点;
1．延伸性能好，可合成长达12.5 Kb的fμLl-length cDNA。
2．最佳反应温度为42℃，但在50℃时仍然有活性，70℃10分钟能使其失活。
3．能以Cy3-，Cy5-，rhodamine-，aminoallyl-，fluorescein等标记的nucleotides 为底物。
4．可用于first strand cDNA 合成，second strand cDNA 合成，DNA labeling，RNA primer extension等。
5．与PCR 兼容，RT产物可以用于PCR和real-time PCR。
6．能被金属螯合剂，无机磷酸，焦磷酸和多胺抑制。
7．没有RNase H活性。

产品组成：

成分	规格
MMLV逆转录酶(200U/μL)	50μl
5×RT Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有限期一年。

使用方法：

一、合成PCR用的1st-strand cDNA
1．按下表配制RT反应体系:

加入物	加入量
总RNA 或poly(A)mRNA 或专一的RNA	100-500 ng 10-500 ng 0.01pg-500ng
注：RNA样品不能有基因组DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL) 或随机引物(0.2ug/μL) 或RNA模板专一性引物	1μL 1μL 15-20pmol
注：随机引物于RNA模板的比例跟最后得到的cDNA的平均长度成反比
RNase-free水	补水到12μL

2．70℃保温5分钟后立即冰浴。
3．严格按下表顺序加入各成分：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor(20U/μL)	1μL
dNTP(10mM each)	2μL

4．37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃(5分钟)。
5．加入1μL(200U)MMLV逆转录酶，反应终体积为20μL。
6．42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7．70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR模板使用，不需要纯化。

二、合成建文库用的1st-strand cDNA
1．按下表配制RT反应体系:

加入物	加入量
poly(A)mRNA 或专一的RNA	1ug 0.5-1ug
注：RNA样品不能有基因组DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL) 或随机引物(0.2ug/μL) 或RNA模板专一性引物	1μL 1μL 100pmol
注：随机引物于RNA模板的比例跟最后得到的cDNA的平均长度成反比
RNase-free水	补水到12μL

2．70℃保温5分钟后立即冰浴。
3．严格按下表顺序加入各成分：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor(20U/μL)	1μL
dNTP(10mM each)	2μL

4．37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃(5分钟)。
5．加入1μL(200 U)MMLV逆转录酶，反应终体积为20μL。
6．42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7．70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃。