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活死细菌染色试剂盒,荧光成像

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      MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒

    • 供应商

      上海研卉生物科技有限公司

    • 规格

      100t

    活死细菌染色试剂盒,荧光成像
    简要概述

    MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细菌的试剂盒,AAT Bioquest的MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒提供双色荧光检测,通过荧光显微镜观察活细菌和死细菌。MycoLight 520是一种非荧光酯酶底物,可扩散到革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中。在细菌细胞内非特异性酯酶水解后,产生绿色荧光产物并在细菌内积累。相比之下,碘化丙锭是一种红色荧光核酸染色剂,只能穿透受损膜的细菌。因此,使用MycoLight 520和碘化丙锭染料的适当混合物,具有完整细胞膜的活细菌发出绿色荧光,而具有受损膜的死细菌产生红色荧光。MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒是一种用于对活/死细菌进行成像的强大工具。可以在Ex / Em = 488 / 525nm(FITC滤光器组)和540 / 620nm(TRITC滤光器组)下荧光测量染色细胞,分别用于活细菌和死细菌。

    产品说明书

    染色样品示例

    概述

    1.准备100X MycoLight 520原液
    2.准备细菌样本
    3.加入MycoLight 520和碘化丙锭
    4.将细菌样品与MycoLight 520和碘化丙啶在37°C孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟
    5.用FITC和TRITC滤光片组通过荧光显微镜分析样品
    注意:在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒组分

    操作步骤

    在没有额外说明的情况下,所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C,避免反复冻融循环。


    1.MycoLight 520原液(100X):
    将100μLDMSO(组分D)加入MycoLight 520(组分A)的小瓶中。
    注意:将储备溶液储存在-20°C,避免光照,反复冻融。

    2.制备浓度为106至108个细胞/ mL的细菌样品。 在适当的培养基中将细菌培养到对数晚期。

    注意:测量波长= 600 nm(OD600)的细菌培养物的光密度以确定细胞数。 对于大肠杆菌培养物,OD 600 = 1.0等于8×108个细胞/ ml。

    3.通过以10,000xg离心10分钟除去培养基,并将沉淀重新悬浮在测定缓冲液(组分C)中。

    4.通过用70%乙醇处理30分钟,然后煮沸60分钟,可以制备死细菌。
    5.染色
    以下是推荐的方案,应根据不同的细菌菌株或其他特定需求进行优化。 如果观察到更高的背景,可以在成像之前添加任选的洗涤步骤。
    5.1将1μL100XMycoLight 520原液和1μL100X碘化丙啶(组分B)加入到100μL测定缓冲液中的细菌样品中。
    5.2充分混合并在37℃下在黑暗中孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟以获得最佳染色结果。
    5.3通过FITC(Ex / Em = 488 / 530nm)和TRITC(Ex / Em = 540 / 620nm)通道用荧光显微镜监测细菌的荧光。
    染色结果
    产品细节图片1
    图1.用MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒染色活的和死的枯草芽孢杆菌的混合群体。 具有活性细胞内酯酶的活细菌显示绿色荧光,而具有受损膜的70%酒精杀死的死细菌显示红色荧光。
    参考文献

    Raman spectroscopic analysis of Lactobacillus rhamnosus GG in response to dehydration reveals DNA conformation changes
    Authors: Myintzu Hlaing, M.; Wood, B.; McNaughton, D.; Ying, D.; Augustin, M. A.
    Journal: J Biophotonics (2017): 589-597

    Antibacterial and antigelatinolytic effects of Satureja hortensis L. essential oil on epithelial cells exposed to Fusobacterium nucleatum
    Authors: Zeidan-Chulia, F.; Keskin, M.; Kononen, E.; Uitto, V. J.; Soderling, E.; Moreira, J. C.; Gursoy, U. K.
    Journal: J Med Food (2015): 503-6

    Inactivation of Cronobacter sakazakii in reconstituted infant formula by combination of thymoquinone and mild heat
    Authors: Shi, C.; Jia, Z.; Chen, Y.; Yang, M.; Liu, X.; Sun, Y.; Zheng, Z.; Zhang, X.; Song, K.; Cui, L.; Baloch, A. B.; Xia, X.
    Journal: J Appl Microbiol (2015): 1700-6

    Fourier transform infra-red spectroscopy and flow cytometric assessment of the antibacterial mechanism of action of aqueous extract of garlic (Allium sativum) against selected probiotic Bifidobacterium strains
    Authors: Booyens, J.; Thantsha, M. S.
    Journal: BMC Complement Altern Med (2014): 289

    Deposition and survival of Escherichia coli O157:H7 on clay minerals in a parallel plate flow system
    Authors: Cai, P.; Huang, Q.; Walker, S. L.
    Journal: Environ Sci Technol (2013): 1896-903

    Observation of injured E. coli population resulting from the application of high-pressure throttling treatments
    Authors: De Lamo-Castellvi, S.; Toledo, R.; Frank, J. F.
    Journal: J Food Sci (2013): M582-6

    Effect of air drying on bacterial viability: A multiparameter viability assessment
    Authors: Nocker, A.; Fernandez, P. S.; Montijn, R.; Schuren, F.
    Journal: J Microbiol Methods (2012): 86-95

    patients and environment
    Authors: Lindback, T.; Rottenberg, M. E.; Roche, S. M.; Rorvik, L. M., The ability to enter into an avirulent viable but non-culturable (VBNC) form is widespread among Listeria monocytogenes isolates from salmon
    Journal: Vet Res (2010): 8

    Behaviors of physiologically active bacteria in water environment and chlorine disinfection
    Authors: Sawaya, K.; Kaneko, N.; Fukushi, K.; Yaguchi, J.
    Journal: Water Sci Technol (2008): 1343-8

    Long-term survival of Legionella pneumophila in the viable but nonculturable state after monochloramine treatment
    Authors: Alleron, L.; Merlet, N.; Lacombe, C.; Frere, J.
    Journal: Curr Microbiol (2008): 497-502

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