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大量
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MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒
- 供应商:
上海研卉生物科技有限公司
- 规格:
100t
简要概述
MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细菌的试剂盒,AAT Bioquest的MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒提供双色荧光检测,通过荧光显微镜观察活细菌和死细菌。MycoLight 520是一种非荧光酯酶底物,可扩散到革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中。在细菌细胞内非特异性酯酶水解后,产生绿色荧光产物并在细菌内积累。相比之下,碘化丙锭是一种红色荧光核酸染色剂,只能穿透受损膜的细菌。因此,使用MycoLight 520和碘化丙锭染料的适当混合物,具有完整细胞膜的活细菌发出绿色荧光,而具有受损膜的死细菌产生红色荧光。MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒是一种用于对活/死细菌进行成像的强大工具。可以在Ex / Em = 488 / 525nm(FITC滤光器组)和540 / 620nm(TRITC滤光器组)下荧光测量染色细胞,分别用于活细菌和死细菌。
产品说明书染色样品示例
概述
1.准备100X MycoLight 520原液
2.准备细菌样本
3.加入MycoLight 520和碘化丙锭
4.将细菌样品与MycoLight 520和碘化丙啶在37°C孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟
5.用FITC和TRITC滤光片组通过荧光显微镜分析样品
注意:在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒组分
操作步骤
1.MycoLight 520原液(100X):
将100μLDMSO(组分D)加入MycoLight 520(组分A)的小瓶中。
注意:将储备溶液储存在-20°C,避免光照,反复冻融。
2.制备浓度为106至108个细胞/ mL的细菌样品。 在适当的培养基中将细菌培养到对数晚期。
注意:测量波长= 600 nm(OD600)的细菌培养物的光密度以确定细胞数。 对于大肠杆菌培养物,OD 600 = 1.0等于8×108个细胞/ ml。
4.通过用70%乙醇处理30分钟,然后煮沸60分钟,可以制备死细菌。
5.2充分混合并在37℃下在黑暗中孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟以获得最佳染色结果。
5.3通过FITC(Ex / Em = 488 / 530nm)和TRITC(Ex / Em = 540 / 620nm)通道用荧光显微镜监测细菌的荧光。
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文献和实验,随着细胞增殖周期的各时相而发生变化。荧光染料(如PI)可选择性地定量嵌入核酸(DNA/RNA)的双螺旋碱基之间,与细胞特异性结合,DNA含量与荧光染料的结合量成正比,因此通过测定荧光强度可获知细胞的增殖情况。 1. 将固定过的细胞离心(500~1000rpm,5min)弃上清液,再用PBS洗涤2次。 2. 用PBS调整细胞浓度,每份为1×106个细胞/100μl。 3. 加入1000μl DNA 荧光染料(通常用Coulter公司提供的DNA染色试剂盒),室温下避光
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