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- ATCC
- XY-XB-1845
- 中国/美国
- 2025年07月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 细胞类型：
科研
- 品系：
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- 组织来源：
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- 物种来源：
鼠/人/其它
- 细胞形态：
上皮样/成纤维样/其它
- 器官来源：
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- 运输方式：
常温运输/干冰运输
- 年限：
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- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 英文名：
RAW264.7
RAW264.7;单核细胞－巨噬细胞详细信息请向我司客服索取
ATCC货号：RAW264.7;单核细胞－巨噬细胞
1. 液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？
要冷藏！！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。
2.液体培养基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。
几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20 ◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 ◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。基础医学细胞中心在其服务项目中配制分装了高浓度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml完全培养基中，其终浓度为2mM/ml培养基。包装为粉红色，-24◦C保存。
3. 培养用液pH对细胞生长的影响
由于，大多数细胞适宜pH为7.2~7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。
但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更利于细胞生长。因此，我们在配制培养用液时，可把液体的pH稍微调得偏酸一些。液体在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的pH还会向上浮动0.2左右。
4.细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？
不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液浓度为：
（1）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ；
（2）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ。
（3）0.25% 胰蛋白酶
溶液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制。
多数细胞传代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ这种消化液。
购买上海烜雅生物细胞注意事项（烜雅生物）发布
一、客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；
收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
二、如为贴壁细胞，请在显微镜下观察细胞密度：
1. 未超过80%汇合度时，用75%酒精（建议配置75%酒精的水也是灭菌超纯水，喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作；然后打开盖子，先用枪头把培养基吸出10ml左右，放在离心管里，然后瓶口过火（严禁直接倾倒），这样可以保证不污染，再用10ml的移液管，将剩余的培液全部吸出，放于离心管中，培养瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培养16hr(时间根据细胞生长情况调整）之后，传代或者冻存。
2. 超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。具体步骤如下：
1) 弃去培养液，用3ml PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次；
2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于T25培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来；
3) 加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中，按要求分瓶。
三、如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心5分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
注意：换液时一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。
四、细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
（1）细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；
（2）冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；
（3）存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；
（4）冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；
（5）视具体情况而定。
五、细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（4）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（5）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（6）视具体情况而定。
六、售后服务政策
细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，我们调查核实后予免费调换，不收取任何费用。
RAW264.7;单核细胞－巨噬细胞质量可靠，售后有保障
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文献和实验RAW264.7因是单核巨噬细胞其生物学特性就是贴壁特别牢，普通的方法根本就不可能将它消化下来，这也是养这种细胞最头痛的问题。现将我的一点心得，简介如下：消化液：0.5％胰酶、0.2％EDTA，实验前加温到37度以50ml培养瓶为例：1、细胞贴壁生长，长满瓶底80％时，弃去培养液，加D-HANKS 漂洗 两次；2、 加入含胰酶和EDTA的消化液1－2ml,消化37℃约2-5min，镜下可见细胞基本圆形回缩即中止消化，弃消化液加D-HANKS 漂洗两次；3、加入新培养液10ml复吹打混悬细胞
MOI 值 50-200，puromycin 常规剂量 1-2 µg/mL；一般不需要加助转剂 polybrene。 ②Jurkat 细胞 Jurkat 细胞是一种常用的人类T细胞白血病细胞系，是一种悬浮细胞。慢病毒感染悬浮细胞步骤可以参考上文。 Jurkat 细胞感染慢病毒的 MOI 以 50-80 为宜，一般不需要加助转剂 polybrene。 图 6：慢病毒感染 Jurkat 细胞 ③RAW264.7 细胞 RAW264.7 中文全名为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞，属贴壁细胞，最好的形态呈现
毒性作用。EST12 蛋白导致小鼠腹腔巨噬细胞（图 1A 和 B）、人单核细胞 THP-1（图 1C）和小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDMs）死亡（图 1D）。结果表明，EST12 对巨噬细胞具有较强的毒性。 图 1 巨噬细胞焦亡诱导蛋白 EST12 的鉴定 A-D：分别用 EST12 和 Rv1577 处理小鼠腹腔巨噬细胞（A、B）、PMA 分化的 THP1 细胞（C）、小鼠骨髓巨噬细胞 BMDMS（D），采用 LDH 释放法分析。E：WB 检测 2μＭ EST12 或 RV1577 处理巨噬细胞
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