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文献和实验即水饱和的溴酚蓝液。在15ml灭菌离心管中,依次加入以下各种成分:4.0ml 10 × FA buffer3.1ml 甲酰胺2.0ml 100%的甘油720ul 37%的甲醛80ul0.5M的 EDTA (PH 8.0)16ul 水饱和的溴酚蓝100ul DEPC水混匀,分装,-20℃保存,常用放4℃保存。5、1×甲醛变性胶电泳缓冲液(1×running buffer):20 ml 10×FA gel buffer,4.0 ml 37%的甲醛,176 ml水,放入电泳槽中使用,一般在3次电泳结束后需
5、1×甲醛变性胶电泳缓冲液(1×running buffer):20 ml 10×FA gel buffer,4.0 ml 37%的甲醛,176 ml水,放入电泳槽中使用,一般在3次电泳结束后需更换此电泳缓冲液。 6、1.2%的甲醛变性胶:称0.4克琼脂糖,加入3.34 ml 10×FA gel buffer,加入30 ml DEPC水,微波炉融化,肉眼观察无颗粒状悬浮物。冷却至约50-60℃,再加入600 l甲醛,倒入7.5×5.0 cm的凝胶模具中。插入合适长度和宽度的梳子,室温
基因片段。 2. 制备PAGE(聚丙烯酰胺)胶。不同长度的基因片段用不同浓度和交联度的胶,常用 的有19:1,29:1,39:1(丙烯酰胺:甲叉),浓度有8%,10%,12%的。 3. PAGE胶的灌制。将配好的PAGE胶混匀,立即灌至干净的玻璃板中,插上梳子于室温聚合1-2小时。 4. PCR产物的变性及电泳。取1-2ulPCR产物加5ul变性缓冲液,95度水浴或放置PCR仪上变性10分钟,立即拿出冰浴,迅速上样于非变性的PAGE胶,以1×TBE作缓冲液,在一定温度下电泳。根据待测片段的长度调整电压和电泳
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