磷酸酶抑制剂混合物

特别提示：包括磷酸酶抑制剂混合物在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：磷酸酶抑制剂混合物
产品货号：HR0294
产品规格：1ml/5ml

组织细胞裂解过程中释放大量内源性蛋白*酸酶，以各种方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化。本蛋白*酸酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白*酸酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白*酸酶活性。该混合物优化的组成使其可以强烈几乎所有重要的蛋白*酸酶活性，包括蛋白丝/苏氨酸磷酸酶、蛋白酪氨酸磷酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。该混合物为100倍浓缩水溶液，可用于直接加入任何组织类型和细胞的裂解产物中，均能有效抑制磷酸化蛋白质的去磷酸化，从而维护蛋白质的磷酸化状态。适用于Western Blot和免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白激酶活性测定等。

储存条件：2-8℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

使用方法：
按照1:100 比例，将混合物加入组织细胞裂解液中，混匀即可。

除了磷酸酶抑制剂混合物,，我公司还供应以下相关产品：



名称：n-十二烷基β-D-麦芽糖苷
货号：BTN131046
规格：1g
本产品用于溶解膜蛋白并保持其活性。HPLC测定其纯度＞99%。低紫外吸收(1%溶液的A280＜0.04)。与其他的去垢剂相比能够更好地保持溶解后膜蛋白的活性。


储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

名称：质谱兼容型蛋白银染试剂盒
货号：BTN100811
规格：10次
银染是目前检测PAGE电泳分离后的蛋白质的zuì灵敏的方法，MS(质谱)是确定未知蛋白zuì常用和zuì快捷的方法，但将银染得到的蛋白直接用于MS分析有很多问题，其中zuì主要问题是常规银染所使用的试剂(包括强氧化剂和醛类)容易使蛋白质发生化学修饰，这样MS分析得到的氨基酸信息跟蛋白质实际的氨基酸信息并不相同。为了使银染得到的蛋白质可以用于MS分析，为此本公司开发MS 兼容型银染试剂盒。

产品特点：
1．跟MS 兼容，原理是避免使用能化学修饰蛋白质的试剂，所得蛋白质没有发生化学修饰，故可直接用于后续的MS(包括MALDI-TOF-MS和ESI-MS)分析。
2．银染的灵敏度比考马斯亮蓝染色高100倍左右，可达0.2-0.6ng蛋白质/条带。
3．可用于各种PAGE胶，包括变性PAGE胶(如SDS-PAGE，尿素-PAGE)，非变性PAGE胶，IEF胶(等电电泳胶)，2D胶等。
4．四种溶液都是现用现配，实验结果的可重复性好。

产品组成：

成分	规格
溶液A组分一干粉	1份
溶液A组分一溶剂	100ml
溶液A组分二干粉	10份
溶液B干粉	5g
溶液C组分一干粉	10份
溶液C组分二	2ml
溶液D干粉	10份
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

准备工作：
所有溶液均需现配现用。以下按一块PAGE胶需要200mL溶液配制，用户可以根据自己PAGE胶的大小增减溶液的用量。
一、用自备试剂配制400mL固定液(按一次银染需要固定2次计算，每次固定需200mL固定液)
将160mL甲*、40mL乙酸和200mL去离子水充分混合后即得400mL固定液。
二、配制200mL溶液A
先配制溶液A组分一储备液：将溶液A组分一干粉加入到100mL溶液A组分一溶剂中，充分摇晃溶解即得溶液A组分一储备液。此溶液可以4℃保存。将60mL甲*、8mL溶液A组分一储备液、1 份溶液A组分二(干粉)和132mL 去离子水充分混合后即得200mL溶液A。
三、配制200mL溶液B
称0.5g溶液B干粉，溶于200mL 去离子水中，充分混合后即得200mL溶液B。
四、配制200mL溶液C
将1 份溶液C(干粉)溶解在200mL 去离子水中(干粉不容易溶解，需搅拌)即得溶液C。注意：使用前还需要再加入160μL溶液C组分二并充分混匀。
五、配制200mL溶液D
将1 份溶液D(干粉)溶解在200mL 去离子水中即得溶液D。

银染：
1．PAGE电泳(包括非变性PAGE，SDS-PAGE，尿素-PAGE，2D-PAGE，IEF-PAGE等)结束后，将PAGE胶转移到装有200mL 固定液的瓷盘或玻璃盘中，摇晃30分钟以去除干扰银染的组分(如甘氨酸、SDS、尿素、DTT、甘油等)，倒掉固定液。注：此步很重要，否则银染背景很高。
2．重复上步一次。
3．将PAGE胶转移到200mL溶液A中，室温摇晃30分钟。
4．用200mL 去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。
5．将PAGE胶转移到200mL的溶液B中，室温摇晃20分钟。
6．用200mL 去离子水漂洗2次，每次1分钟(不要延长或缩短)。
7．将PAGE胶转移到200mL的溶液C中，室温摇晃直到蛋白电泳条带显现(一般需要10分钟左右)。
8．将PAGE胶转移到200mL的溶液D中，室温摇晃终止反应。
9．用200mL 去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。
10．切下条带或胶块进行后续的脱银，原位trypsin酶解，多肽沉淀和MS分析(略)。

技术资料：
MS前处理步骤(仅供参考)
1．脱银：将切下的银染斑点或条带用脱银液(30mM K3Fe(CN)3和100mM Na2S2O3的1：1的混合液)处理直到黑色消失。
2．还原：将胶块或胶条置于10mM DTT(溶剂为50mM NH4HCO3)，56℃处理一小时。
3．烷化：将胶块或胶条置于55mM *乙酰胺(溶剂为50mM NH4HCO3)，室温避光处理45分钟。
4．原位trypsin酶解：将胶块或胶条置于10 ng/uL 测序级别的trypsin溶液中(溶剂为25mM NH4HCO3)，37℃处理过夜。
5．多肽提取：用5%三氟*酸抽提酶解液，再用2.5%三氟*酸-50%ACN 混合液抽提酶解液，上清真空干燥，沉淀(多肽)zuì后溶于0.5%三氟*酸中。
6．MS分析：参考相关MS仪器使用手册。