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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃&-80℃
- 保质期：
3个月~12个月
- 英文名：
pMD18-Control质粒
- 库存：
41
- 供应商：
上海禾午生物科技有限公司
- 规格：
2ug冻干粉&300ul甘油菌
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文献和实验编码区的基因片段，其由5'末端的stat密码子（ATG）和3'末端的终止密码子（TAA，TAG或TGA）结合。然后将目的基因片段插入pMD18-T载体中以构建重组质粒，通过DNA测序鉴定。用指定的酶消化重组pMD18-T质粒，并通过以下方案将检索到的目的DNA片段亚克隆到pET-32α（+）载体中以产生重组表达载体。将约129bp的TBO基因片段插入pET-32α（+）载体（5900bp）用相同的限制酶在37℃消化pET-32α（+）载体和重组pMD18-T载体1小时，然后通过在65℃温育10分钟
需求来确定所用的模板质粒。重组质粒载体构建可以经过酶切酶连、无缝克隆、Gateway 克隆等方式将目的片段连接到目标载体上，或者对载体上的一些元件进行改造。改造好的质粒转入大肠杆菌中进行扩增及抽提。 3、质粒抽提的一般操作流程 从培养的大肠杆菌中抽提质粒，一般需要经过大肠杆菌培养、菌液收集、菌体裂解、基因组 DNA 及蛋白沉淀、质粒吸附、质粒漂洗、质粒洗脱、质粒检测、质粒保存等流程。 内容来源：QIAGEN 凯杰
表达」风险的序列，也可以添加操纵子元件，抑制泄露表达。 6. 何防止质粒被污染？污染后如何处理？ 质粒发生污染分两种情况，第一，保存的质粒发生了污染；第二，在质粒抽提之前，大肠杆菌的菌液发生了污染。 如果是抽提的质粒发生了污染，首先建议整管质粒弃用；应重新培养保存细菌，再抽提质粒。若怀疑质粒交叉污染（如多个质粒混合），应重新转化、挑单克隆、测序确认。如果已经没有保存的细菌，则可以将质粒重新转化大肠杆菌，挑选单克隆、摇菌、抽提质粒、测序确认，确认质粒无污染、无突变后，再进行大量培养抽提质粒备用
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