pSH47酵母编辑质粒

质粒构建及提取概述

1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A

CRISPR-Cas9 技术敲除酵母菌 ADE1 基因

选育新方法。而 CRISPR-Cas9 技术的出现，更是极大推动了微生物基因组编辑准确性和效率的提高。【背景】泓迅科技利用 CRISPR-Cas9 技术编辑酵母菌中的一个 920bp 的 ADE1 基因。ADE1 是腺嘌呤合成相关基因，如果 ADE1 失活，则细胞将会积累红色色素，呈现红色菌落。【方法】1、质粒构建2、sgRNA 活性检测3、挑选活性较高的 sgRNA 进行基因组定点编辑4、利用基因功能变化、表性变化和测序等方法检测基因定点修饰结果。【结论】1、从颜色表型变化得知，酵母菌落变成红色菌落，可知 ADE

如何查找质粒图谱

系统的质粒信息。 不过唯一有一点不爽的就是，这个网站竟然没有搜索栏啊，太不人性化了。那如何在那么多质粒信息中查找到我们所需要的质粒的信息呢？没关系，我们有网页字符查找功能，见红色标记部分。 方法是：网页工具栏 编辑——–在此页上查找，然后输入你的质粒名称，就可以了。比如：我们输入pRS，是不是就和搜索栏一样出现有用信息了？ 点击我们需要的质粒进入下以页面，以质粒pRS303为例，如下图。有用信息除了对该质粒进行的一些描述性语言外，最重要的要算是红色标记部分