2×Long Taq PCR MasterMix

特别提示：包括2×Long Taq PCR MasterMix在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×Long Taq PCR MasterMix
产品货号：RFT092
产品规格：500μl|5×500μl

本品包含Long Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂，浓度为2×。使用时，只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应，可最大限度的减少人为误差，具有快速简便、稳定性好等优点。用于短链和长链DNA扩增，特别适合于长片段DNA的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物末端含有一个A碱基，可以直接用于TA克隆。

质量控制：经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余基因组DNA；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。

使用方法;
1、冰浴中彻底融化2×MasterMix，混匀后Minispin将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:
 

	50μl反应体系	终浓度
2×MasterMix	25μl	1×
上游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
下游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
模板	×μl	10pg-1μg
水	补至50μl

3、快甩离心将反应液收集到管底。
4、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
5、PCR仪上执行以下程序：

三步法：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	1-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	Tm-5℃*	30 sec
延伸	72℃	1 min/kb
最后延伸	72℃	5 min	1

两步法：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	1-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火和延伸	68℃	1 min/kb
最后延伸	72℃	5 min	1

注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

除了2×Long Taq PCR MasterMix,，我公司还供应以下相关产品：



名称：miRNA荧光定量RT-PCR检测试剂盒
货号：BTN131042
规格：25次
本试剂盒采用SYBR Green I 嵌合荧光染料法的原理来进行miRNA荧光定量PCR检测。本产品是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂。2×miRNA qPCR Mix包含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂等所有PCR所需要的成分。miRNA qPCR Mix中所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。其中的Taq DNA polymerase是经化学修饰的高效热启动酶，配合独特的缓冲体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内对miRNA进行准确定量。

产品特点：
1. 简便、快捷完成miRNA的检测。
2. 检测通量高，只需最少的RNA样本，即可同时进行多种目标miRNA的检测。
3. 检测特异性好，独特的miRNA引物设计技术及其优化的反应体系避免了非特异性扩增、特别是Pre-miRNA的污染。
4. 检测分辨率高：该系统能分辨单碱基差异的miRNA。
5. 检测灵敏度高：可在低至pg级的总RNA中检测到特异表达的miRNA。

试剂盒组成：

成分	规格
2×miRNA qPCR Mix	0.75ml
Reverse Primer(10μm)	30μl
RNase-Free Water	1ml
miRNA cDNA第一链合成试剂盒	25T
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、miRNA cDNA第一链合成
请参见miRNA cDNA 第一链合成试剂盒产品使用说明书。

二、miRNA荧光定量检测
1.室温融化2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer(10μm)。
2. 使用时请将2×miRNA qPCR Mix上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经短暂离心后使用。如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。
3. 按照下表组分配制荧光定量PCR反应体系：

试剂组份	体积
2×miRNA qPCR Mix	25μl
Forward Primer(自备)	1μl
Reverse Primer	1μl
miRNA 第一链cDNA	xμl
RNase-Free Water	至50μl

4. 建议反应程序设置如下：

循环	温度	时间
1×	95℃	10min
40～45×	95℃	15s
	60℃	1min
溶解曲线分析	根据PCR仪要求设定

注意事项：
1. miRNA 第一链cDNA的加入量不要超过Real time PCR 体积10%。
2. 对于特殊的检测体系，高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增，根据所检测miRNA的丰度适当的稀释cDNA(稀释10倍或者100倍)。
3. 2×miRNA qPCR Mix中含有SYBR Green I和ROX染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。