dNTP混合溶液(25 mM each)

特别提示：包括dNTP混合溶液(25 mM each)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：dNTP混合溶液(25 mM each)
英文名称：dNTP Mix (25 mM each)
产品货号：SY0048
产品规格：250ul

dNTP Mix为dATP、dCTP、dGTP和dTTP的预混溶液，各自的浓度为25mM，适合用于PCR扩增、real-time PCR、cDNA或普通DNA合成、DNA测序和标记等各种常规分子生物学实验。

dNTP Mix用超纯水配制，并用高纯度NaOH溶液调节pH值至7.0，纯度≥99%（HPLC）。经检测，不含DNase、RNase、phosphatase。

注意事项
1)可以室温溶解，溶解后宜存放于冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即置于-20℃保存。
2)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

除了dNTP混合溶液(25 mM each),，我公司还供应以下相关产品：



名称：25mM氯化锰溶液(PCR级MnCl2溶液)
货号：BTN130307
规格：5mL
本产品为专门用于易错PCR的MnCl2水溶液，浓度为25mM，可用于调节MnCl2的最佳浓度。由于Mg2+在PCR过程中可以稳定非互补的碱基对，Mn2+能够降低聚合酶对模板的特异性，因而调整两种离子的浓度，可获得不同突变频率的多样性文库。

氯化锰分子量为125.8，CAS号为7773-01-5，水合氯化锰外观为玫瑰色单斜晶体；无水氯化锰外观为桃红色结晶。密度为2.977g/cm3。熔点是650℃。在高于熔点温度下升华。沸点1190℃。易溶于水，溶于醇，不溶于醚。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

名称：Taq DNA Polymerase
货号：WE0101
规格：500U|2500U|10000U
  Taq DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶。其基因来源于Thermus aquaticus polymerase。该蛋白分子量为94 kDa，具有5"→3"DNA聚合酶活性和5"→3"外切核酸酶活性，无3"→5"外切核酸酶活性，扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高的特点，主要适用于PCR法扩增DNA片段、DNA序列测定等实验。

产品组成：

组份	500 U	2500 U	10000 U
Taq DNA Polymerase(5 U/μl)	100μl	5×100μl	2×1ml
10×PCR Buffer	1.8ml	5×1.8ml	8×5ml

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
Taq DNA Polymerase	0.25-0.5μl	1.25-2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件:
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2min
变性	94℃	30s	25-35个循环
退火	55-65℃	30s
延伸	72℃	30s
终延伸	72℃	2min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。