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江西江蓝纯生物试剂有限公司
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产品简介:
脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有机溶剂(如乙醇)。人体的脂肪主要有两种:1、储存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。2、结构脂肪,如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等),主要分布于细胞内。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类,呈中性。中性脂肪是储存能量的方式之一,在氧化时释放出能量。
在正常情况下,除脂肪细胞外,其他细胞在光学显微镜下几乎看不到脂滴,如果细胞质内出现大量脂滴即为脂肪变性,常见于肝细胞、心肌细胞、肾曲管上皮细胞等。中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。苏丹染料脂质染色的机理一般认为纯属物理学的脂溶作用和吸附作用。苏丹类染料由于在脂质中的溶解度大于在有机溶剂的溶解度,所以染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去,使脂质呈现出染液的颜色。
苏丹Ⅳ染色液-A液即Sudan Ⅳ stain,主要用于显示组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着,常发生于肝、肾、心等实质脏器的脂肪变性,细胞内出现多数中性脂肪滴;鉴别和诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质。标本不采用含有乙醇的固定液(如需要固定可采用10%福尔马林)、也不采用石蜡切片,需用冰冻切片或碳蜡切片。
苏丹Ⅳ染色液-A液
注意事项:
脂肪染色时标本不宜采用含有乙醇的固定液、也不宜用石蜡切片,需用冰冻切片。
在染色过程中必须防止染料发生沉淀。故切片入染液时应密封,勿与流动空气相接触,避免溶液挥发时发生沉淀。
冰冻切片较易着色,复染时应避免过染。
苏丹染料容易褪色,应密闭保存。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验小时后即可使用。 注:此液5天内失效,如此看来,浪费较大,建议配制70%酒精饱和液,或纯丙酮和70%酒精饱和液,它们使用方便,且不易失效。 结果:脂肪呈猩红色,比苏丹Ⅲ更为清晰。 三、油红染色法: 油红作为脂肪染色剂,其染色步骤简便,染色结果肯定,并且优于苏丹Ⅳ。 试剂配制: 油红O 0.5g 异丙醇(含量98%) 100ml 此为油红饱和液,可长期保存备用。 染色步骤: (1)冻切片 (2)蒸馏水充分洗涤
加入120ml蒸馏水中水浴加热使其完全溶解,再加入60ml甘油和1g苯酚,充分混匀后即得。于4℃储存备用。 染色步骤: 1. 用Hanks液漂洗盖玻片3次; 2. 用甲醛钙固定液固定20min; 3. 用蒸馏水漂洗盖玻片3次; 4. 用70%乙醇将盖玻片冲洗3次; 5. 用苏丹红Ⅲ染色液覆盖盖片样品,染色10—30min; 6. 用70%乙醇漂洗盖片3次; 7. 用甘油明胶封片后观察。 结果: 原代细胞含脂类的区域呈橘红色。
乙醇苏丹黑 B 脂类染色法 苏丹染色法常用染料有苏丹黑B(Sudanblack-B)、苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ。这类染料均可使 中性脂肪着色。苏丹黑B为重氮染料,能使中性脂肪呈蓝黑色,显示磷脂效果最好;苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ为红色染料,后者比前者显色更强。 当组织切片置于染料时,苏丹黑B离开染液而溶于组织内的脂滴中,使组织内的脂类着色。由于苏丹黑B可与大多数脂类高度结合,故在组织化学上常用此法作为脂类存在的依据。此法常用?0%乙醇配制苏丹黑B的饱和液作为染剂,也可用?0%乙醇与丙酮各半
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