- ¥140
- 晶抗
- JK2926
- 进口/国产
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海晶抗生物工程有限公司
- 保存条件：
4℃
- 规格：
50ml
BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒(BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit)是一种用于免疫组化显色、Western等膜显色和诱导多功能干细胞iPS鉴定等的试剂盒。BCIP/NBT是碱性磷酸酯酶的常用底物，在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。
自备材料：
1、 洗涤液
2、 (可选)中性红染色液
操作步骤(仅供参考)：
对于组织切片或细胞样品或膜，在与碱性磷酸酯酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
对于检测内源性碱性磷酸酯酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
洗涤完毕后，去除洗涤液。
加入适量BCIP/NBT染色工作液，确保能充分覆盖样品。
5、室温避光孵育5～30min或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。
6、去除BCIP/NBT染色工作液，用蒸馏水洗涤1～2次即可终止显色反应。
7、对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色，以便于观察。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。
注意事项：
BCIP对人体有刺激性，NBT对人体有害，请注意适当防护。
操作过程中，尽量避免强光照射。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验检测方法 对于探针和靶序列杂交之后的检测，我们通常使用碱性磷酸酶（AP）耦联的抗体，采用显色法或化学发光法检测。在碱性磷酸酶的底物中，我们使用CDP-Star或CSPD用于化学发光法检测，NBT/BCIP用于显色法检测。同时，对于膜杂交中的化学发光信号的检测，建议使用Lumi-Film以获得最理想的信号。 检测底物 即用型CDP
一般 沉淀颜色 紫色 蓝紫色 蓝紫色 棕红色 用途 AP显色 AP或者葡糖氧化酶 WB、原位杂交和免疫组化 AP和免疫组化 四种常用AP显色方法的比较 上表列举了常用的AP显色方法比较，包括BCIP（5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐）、NBT（四唑硝基蓝）和INT（硝基四紫唑），以及它们之间的组合使用。其中，BCIP/NBT是碱性磷酸酶的最佳底物组合之一，具有灵敏度最高、显色锐利、成像性能好等特点，是最常
漂洗10～30min。 （12）2×SSC（含20μg/mlRNaseA, 适于RNA探针）冲洗30min，37℃。 （13）1×SSC，0.1×SSC,37℃各漂洗10～30min。 （14）0.05mol/l PBS 冲洗4×5min。 （15）3%BSA（0.4%Triton X-100 PBS配）37℃保温30min。 （16）Avidin �AKP(碱性磷酸酶)（1：500～1：100，0.4%Triton X-100 PBS配）室温1～3h
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