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标本溶血:
1、脱水、休克等疾病使得穿刺困难而溶血;
2、抽血器质量不合格导致溶血;
3、血清分离不当导致溶血;
4、红细胞有先天或获得性缺陷而易破坏溶血;
5、患溶血性疾病。
溶血的干扰机理:
1、血细胞中浓度远高于血清浓度:血细胞中高浓度物质溢出,测定结果偏高。如K、CK、LDH、AST等,轻度溶血即可有很大影响。
2、血细胞中浓度低于血清浓度:此时溶血相当于血清稀释而结果偏低。如血糖、r-GT等。
、检测大多是检测化学反应前后颜色变化程度来计算待检物浓度。血红蛋白的红颜色会造成干扰。
控制影响因素:
开展常规项目的室内质量控制,绘制质控图和观察室内环境;谨慎使用检测方法学;
在使用某一方法时,先虑标本量是否太少或血清凝固,需重新处理标本进行测定;如果是采用速率法,要考虑是否是酶活力过高;动态反应曲线是否正常,注意有无提示数据报警;
仪器方面,如果发现某一时间的结果全部偏低,就要考虑是否引入了系统误差,是否发生仪器的样品针堵塞,搅拌棒搅拌不均等情况,或样品针注射器漏气,或试剂的交叉污染,或光源灯老化等问题;避免标本的溶血或脂血现象。
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文献和实验一、目的 学习和掌握考马斯亮蓝G-250 测定蛋白质含量的原理和方法。二、原理 考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250 在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白
一般R250 染蛋白,G250 一般测蛋白浓度,也可染胶,敏感性更高但较慢脱色较难。 G250常用的蛋白染料,作定性试验用,染色后为蓝绿色;R250较敏感,,做定量实验用,染胶效果较好.染色后为红蓝色 考马斯亮蓝R250(Coomassie brilliant blue R250)。C45H44O7H3S2Na,MW=824,λmax
一、原理:考马斯亮蓝G—250法于1976年由Bradform建立。考马斯亮蓝G—250具有红色和蓝色两种色调,在酸性溶液中,其以游离态存在呈棕红色,当它与蛋白质通过疏水作用结合后,变为蓝色。色素对可见光谱的最大吸收值从465nm转移到595nm处。蛋白质和色素的结合反应很快速,约在2分钟左右的时间内达到平衡,在室温1小时之内是稳定的。在0.01一1.0mg蛋白质/m1范围内,蛋白质含量与A 595值呈正比。二、染液配制: 100mg的考马斯克蓝G—250溶解于50m1 95%的乙醇中,加入
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