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大量
- 保质期:
3个月
- 供应商:
上海机纯实业有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
2×100ml
注意事项:
1、 如待检测组织富含内源性链亲和素-生物素,应考虑使用非链亲和素-生物素检测系统。
2、 避免反复冻融,否则容易失效。
操作步骤(仅供参考):
1、 切片脱蜡、水化。
2、 入内源性亲和素封闭液,孵育20min。
3、 PBS或Tris缓冲液中清洗5min。
4、 入内源性生物素封闭液,孵育20min。
5、 PBS或Tris缓冲液中清洗5min。
6、 进行免疫染色的步骤。
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文献和实验与生物素高度特异性结合的关系来放大免疫组化信号,但此方法有产生内源性生物素背景的可能性。而酶标聚合物法,利用聚合物与二抗结合,形成聚合物-二抗复合物,实现信号放大,该方法不受内源性生物素的干扰。 表 2 免疫组化多种检测系统分类 图 2 酶标聚合物法检测系统 图 3 链霉亲和素-生物素法检测系统 在显色法中,针对 HRP(辣根过氧化物酶)显色系统,其常用底物为DAB/AEC(HRP/DAB 呈棕褐色染色,具有很好的光稳定性,HRP/AEC 呈红色染色,在阳光下会褪色,不易保存。 基础 IHC
SABC 法与其他免疫组织化学染色方法比较 SP法或SAP法 该法由于用链霉亲和素替代ABC法中的亲和素―生物素复合物,因此背景清晰,敏感性增加,无非特异性染色,阳性反应易于辨认。是目前最常用的方法。在操作步骤中,与SABC法相比,仅有一个步骤不同,即试剂盒中的链霉菌抗生物素―过氧化物酶替代了亲和素―生物 素―过氧化物酶。因此无需使用生物素阻断剂消除内源性生物素。SP法与SAP法的区别在于前者的放大系统为链霉亲和素―过氧化物酶,后者是链霉亲和素―碱性磷酸酶,故导致
酶底物显色。目前常用的亲和素从链霉菌(streptomyces)培养物中提取,因此称为链霉亲和素—生物素—过氧化物酶复合物技术(streptavidin biotin-peroxidase complex method,SABC法)。限于篇幅,详细的操作步骤,点这里→ 阅读全文 免疫组化 Elivison 二步法 EnVision 显色系统是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体(即 EnVision)直接放大信号40-50倍,把传统的二抗、三抗分别孵育合为一次孵育。特点:敏感、省时、方便
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