蛋白脱盐柱

特别提示：包括蛋白脱盐柱在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：蛋白脱盐柱

产品货号：蛋白脱盐柱
产品规格：1个

蛋白脱盐柱是一种方便的蛋白脱盐工具，只需要离心操作即可以用来对蛋白质液体样本进行脱盐，还可以用于蛋白质、抗原、抗体、酶和微生物的浓缩纯化。也可以用来对蛋白质样品中的盐分、糖类、核酸、非水溶剂及其他一些低分子量物质进行去除和缓冲液置换。还可以用来分离蛋白质标记时未结合上的游离标记物。
蛋白脱盐柱使用蛋白质低吸附性的再生纤维素过滤膜制造，具有快速、方便、回收率高的特点，可替代并优于透析法脱盐及蛋白沉淀法蛋白浓缩。
蛋白脱盐柱有多种规格可供选择。
可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去垢剂成分的蛋白提取试剂盒，总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。
还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件：室温避光保存。
用过的脱盐管要保持过滤膜湿润，不能干掉。
有效期：一年。
使用前请仔细阅读产品说明书
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。
使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
应用场景：
1．脱盐和缓冲液更换；
2．组织培养提取物或细胞裂解液中大分子组分的纯化；
3．生物样品浓缩：包括各种抗原、抗体、酶、核酸或微生物；
4．对稀释或从柱洗脱液预先纯化的蛋白质进行浓缩。

产品特点：
1．高回收率 >90%；
2．垂直结构的膜减少了浓差极化，加快离心速度，快达 5分钟；
3．热密封膜将下游溶出物污染可能性降到最低；
4．100% 完整性检测确保性能可靠；
5．透明外壳和体积刻度方便样品察看；
6．直接吸取样品减少处理步骤；
7．高浓缩倍数：高达80–100倍
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器
●离心机。可容纳1.5ml微量离心管的固定角度转子离心机。
● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● 移液器 ●冰箱、冰盒
耗材
●离心管 ● 吸头
试剂
● 纯水

使用方法：
清洗脱盐柱：
1．用缓冲液或纯水进行预清洗。也可先用0.1 M NaOH 清洗，再用缓冲液或纯水进行二次清洗。
2．离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。
使用注意事项：
● 不同的蛋白脱盐的速度不同，有的需要长时间离心，有的则很快就好。和蛋白样品纯度，所用buffer 类型，蛋白的浓度有关系。离心时要先短些时间，观察一下脱盐速度；
● 如果需要多次重复使用，离心速度不要太高；
●重复使用时要仔细检查管壁上有没有裂纹；
● 脱盐柱浓缩蛋白会有蛋白损失，样品体积大就分批离心，尽可能不要离心时间太长
● 样品里的杂质如果可能尽量在离心前去除一些。
●分子量小于5kD的溶质可能只有部分被截留。2kD的样品截留率大约只有40%。过滤膜的截留率取决于溶质的分子大小和形状。目的蛋白小于5kD的样品不要使用脱盐柱脱盐。
● 浓缩液的样本回收率低可能是由于吸附损失、过度浓缩，或样本穿过滤膜而造成的。
● 吸附损失取决于溶质浓度、疏水性、与过滤脱盐管表面接触的温度和时间、样本成分及pH。为了最大限度降低损失，离心后请立即回收脱盐后的样本。
● 如果样本的起始浓度很高，请监控离心过程，以免样本过度浓缩。过度浓缩会导致沉淀，这也可能带来样本损失。
● 样本有可能穿过滤膜，务必将每次的滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。
● 样品蛋白最低起始浓度为25μg/ml。
● 加蛋白液或Buffer 到脱盐管时，可以用蓝枪头；但从脱盐管底吸取脱盐好的目的蛋白时，必须用黄枪头；用枪头伸入脱盐管中时，必须防止碰到滤膜，以免戳破滤膜。
脱盐使用方法：
操作步骤：
1．将内管插入所提供的一个微量离心管中。
2．向内管中加入不超过500μl的样本，并盖上盖子。
3．将盖好盖子的脱盐管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央；用一个类似的离心管平衡。
4．以2000-10000×g离心约10-30分钟。
【注】：
● 务必将滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。
● 影响流速的因素包括样本浓度、起始体积、溶质的化学性质、相对离心力、离心转子的角度、滤膜类型以及温度。500μl 样本的典型离心时间大约是10 至30分钟。尽管大部分样本在离心开始后的前5 至10分钟发生过滤，但在离心10 至30分钟后才能达到最低的浓缩液体积(15-20μl)。
5．离心结束后将整个脱盐管从离心机中取出，取出内管。
6．为了回收脱盐后的溶质，将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的离心管进行平衡。以1,000×g离心2分钟，使脱盐后的样本从脱盐内管转移到收集管中。滤液可以保存在收集管中。
【注】：
● 要达到理想的回收效果，请尽早进行倒置离心。
● 也可不倒置离心，直接用移液器直接吸出内管中的样品。
脱盐使用方法：

使用注意事项：
● 盐分通过滤膜的过程不依赖样品的浓度和体积，用过滤的方法来脱盐并不改变缓冲液的组成，比如说，含有500mM 盐分的溶液在第一次离心后它的剩余液体盐浓度并不发生改变，依然是500mM。再往脱盐管中剩余溶液中加入水或无盐缓冲液，再次离心，则会降低溶液中的盐浓度。
● 这个过程我们将它称为等体积过滤，反复多次地操作，可以使溶液盐分降到最低。
● 如果我们想将样品用不同组份缓冲液溶解，则我们可以使用等体积过滤达到目的。样品脱盐后，然后加入目的缓冲液，再进行反复的稀释和脱盐。
操作步骤：
1．把样品置于过滤装置的储液管中；
2．如果样品体积小于过滤装置的最大体积，则可以把它稀释到最大体积后再离心，这有助于更有效地除去盐分；
3．在特定的离心力下和推荐的时间进行离心；
4．将滤过液从滤管中取出，放置一旁；
5．加入水或缓冲液使样品体积达到0.5ml；
6．再次离心；
7．取出滤过液，放置一旁；
8．回收浓缩的已脱盐样品。
【注】：
● 请将两次的滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。
清洗和保存：
1．使用后用水冲洗干净；
2．内管加入超纯水500μl，5000g离心5分钟；
3．净内管中的水，加入500μl 0.1M NaOH，5000g离心20分钟；
4．用0.1M NaOH 浸泡24小时；
5．用水冲洗干净；
6．用无菌水浸泡2-8℃保存。
7．外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。
【注】：
● 1个月不用的话，直接用100mM的NaOH 保存！更长时间的话加0.02%的叠氮钠。
● 再次使用前，用纯水充分冲洗干净，然后在用样品缓冲液平衡。
常见问题分析：
●蛋白脱盐柱会损失蛋白吗？
分子量小于3000 Da的蛋白质或多肽样品会穿透过滤膜，不适合用本脱盐柱进行脱盐。3000 -6000Da的蛋白质会有少量损失。6000Da以上的蛋白质损失很小。
●膜会因为离心时间过长而变干么？
不会，因为脱盐柱有死体积，总会有溶液残留在滤管中。死体积大约10-20μl。
●可以重复使用脱盐柱么？
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可以反复使用多次。但是多次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。
●蛋白在脱盐时出现了沉淀，如何改进？
蛋白如果脱盐过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白脱盐后的最终浓度不超过20mg/ml。对于对脱盐速度敏感而容易沉淀的蛋白，建议的改进方法是：
1)离心力降低30%-50%
2)在脱盐过程中取出脱盐管，用枪头反复吹吸几次。
● 脱盐后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
脱盐管的蛋白最低起始浓度为25μg/ml。请确保的样本的起始浓度大于这个浓度。
如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1)如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
a)使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
b)离心机最近是否有校准过？
c)是否首次尝试这个蛋白？如果能确保用同样的脱盐管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响脱盐效果。
2)如果目的样本也不在滤过液中，那么：
a)蛋白样本起始浓度是否大于25μg/mL？
b)用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c)目的蛋白是不是沉淀了？
●有时候用蛋白脱盐离心管连水都离不下来，可能是什么原因？
如果出现这种情况，可能时过滤膜的孔被堵住。请先用0.1M NaOH 清洗再离心。
最后用缓冲液或纯水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。
● 说明书中推荐在室温下进行离心，考虑到蛋白的稳定性，是否可以在4℃进行离心？
可以，但是低温会增加蛋白样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长。
●可以用于核苷酸纯化与浓缩么？
可以
● 脱盐柱可以用酒精消毒灭菌么？
脱盐柱与70%乙醇是兼容的。
● 是否可以用于高压灭菌？
不可以，脱盐柱都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。
● 是否无热源？
均非无热源的
● 如何对蛋白脱盐管进行去除内毒素的处理？
提供的脱盐管是没有经过去内毒素处理的，同时由于内毒素通常以多聚体的形式存在，大小在10-1000KD 之间不等，在脱盐的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH 预清洗，随后用纯水/缓冲液buffer 清洗的步骤去除大部分内毒素。
● 是否不含RNA酶？
我们不保证脱盐柱不包含 RNA酶，如果需要处理无Rnase 样品，建议您可以用0.1% DEPC在 37℃浸泡 2小时，以完全灭活 RNA酶。残留的DEPC可以用无酶超纯水洗涤除去。
● 没有液流流出，为什么？
可能是溶液比较粘稠或浓度太高；
●蛋白柱去除去垢剂吗？
去垢剂因其独特的性质，当浓度大于临界微团浓度(Critical Micelle Concentration,CMC)时，去垢剂分子会聚集形成微团而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果。小于CMC 值时可以去除。
● 如何判断脱盐管已经失效？
在正常使用下，滤膜没有被戳破时，脱盐蛋白液中不含有蛋白或量很低(包括目的蛋白)，而第一次的滤下液中含有目的蛋白，则说明滤膜失效，需要换新的脱盐管。

除了蛋白脱盐柱,，我公司还供应以下相关产品：



名称：一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(高pH)
货号：BTN81212A
规格：30次
非变性聚丙*酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是目前电泳法分离活性蛋白的主要方法之一，跟SDS-PAGE根据分子量大小分离蛋白质不同，它是根据蛋白质分子大小、形状、电荷密度三个主要参数分离蛋白质。由于蛋白质的pI各不相同，所以对不同蛋白质需要选用具有不同pH的电泳体系。单独配制不同pH的Native PAGE电泳胶十分繁琐，为此本公司开发了本产品。

产品特点：
1．即开即用，不需单独准备各种成分，十分方便。还免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*酰胺
2．非变性，电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用，得到的蛋白质一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白没有活性)。
3．可用于分析蛋白质和DNA或RNA的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。
4．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5．提供具有3种不同pH的缓冲液套装，便于客户选择最适合的缓冲液体系。

产品组成：

成分	规格
丙*酰胺干粉	60g
甲叉双丙*酰胺干粉	3g
TEMED	1.5ml
过硫酸*(代"铵")干粉	1g
高中低缓冲液套装选一	ABC之一(见下)
说明书	1份
高pH缓冲液套装(只有BTN81212A有此成分)
高pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
高pH分离胶配胶液(pH8.9)，4×	200ml
高pH电泳液(pH8.3)	10L(干粉)
高pH上样液，5×	1ml
中pH缓冲液套装(只有BTN81212B有此成分)
中pH浓缩胶配胶液(pH5.5)，4×	100ml
中pH分离胶配胶液(pH7.5)，4×	200ml
中pH电泳液(pH7.0)干粉A	55.2g
中pH电泳液(pH7.0)干粉B	10g
中pH上样液，5×	1ml
低pH缓冲液套装(只有BTN81212C有此成分)
低pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
低pH分离胶配胶液(pH4.3)，4×	200ml
低pH电泳液(pH4.5)	10L(干粉)
低pH上样液，5×	1ml

注：高、中和低pH缓冲液套装里面均含100mL浓缩胶配胶液、200mL分离胶配胶液、10 L电泳液(干粉)和1mL上样液，只是pH不同。

储存条件：常温运输和保存(上样液需-20℃保存)，保存期为一年。

使用方法：
如何选择缓冲液?
高pH浓缩胶，高pH分离胶，高pH电泳液和高pH上样液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此，绝不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。选择适当pH的缓冲液(包括上样液，电泳液，配胶液等)对蛋白质非变性PAGE非常重要，缓冲液的最佳pH又跟目的蛋白质的pI值密切相关。如果pH远离pI，则蛋白质分子带电多(电荷密度大)，电泳速度快，分辨率高。但过酸过碱又容易使蛋白质结构变性，失去活性，所以最佳pH条件就是在电泳分辨率和维持活性之间寻找平衡，需要针对每种蛋白质进行摸索或通过滴定曲线来确定，没有通用的电泳缓冲体系。由于有近半数的蛋白质pI在4-6.5，所以在不知道目标蛋白的pI时，可以先选用高pH缓冲系统。

一、配制分离胶
1．确定浓度。对分子量在100Kd以上的蛋白质，可选用3-5%的胶；对分子量在20-150KD之间的蛋白质，可选用5-10%的胶；对分子量在10-80KD之间的蛋白质，可选用10-15%的胶。对未知样品，建议使用7.5%的胶。
2．配制10%的APS(过硫酸*(代"铵"))：按每0.1克过硫酸*(代"铵")干粉加1mL去离子水的比例配制10%的APS溶液，该溶液可以在4℃存放一周。
3．配制30%丙*酰胺-甲叉双丙*酰胺(19:1)溶液:在本产品提供的装有60克丙*酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和3g甲叉双丙*酰胺,充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)即得200mL 30%丙*酰胺(19:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
4．配10mL分离胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入4.2mL去离子水、3.3mL 30%丙*酰胺-甲叉双丙*酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×分离胶配胶液。
5．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙*酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。注意：如果购买的是低pH缓冲系统，由于在低pH缓冲液中PAGE聚合速度降低，所以需要增加上述两成分的用量。
7．在胶面距离顶部1-1.5 cm的时候停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm厚的水，使胶顶部液面平整。由于比重不同，水和丙*酰胺溶液不会混合。
8．室温聚合30-60分钟后，用1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。

二、配制浓缩胶(浓缩胶可以提高分辨率，适合于成分复杂的样品，一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶pH跟分离胶pH不同，蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品，可以不用浓缩胶，此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度，尺寸和形状相关。)
1．配10mL浓缩胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入6.2mL去离子水、1.3mL 30%丙*酰胺-甲叉双丙*酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×浓缩配胶液。
2．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*酰胺聚合反应，不去除将影响丙*酰胺聚合反应)。
3．按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。
4．在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
5．室温聚合30-60分钟，拔出梳子，用1×电泳液冲洗加样孔。

三、电泳
1．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够1×电泳液。注：本产品提供10升的三种不同pH的电泳液干粉中的一种，低PH和高PH值电泳液用前需将所有干粉溶解在1 L水中得10×电泳液，可以室温放置，用时再稀释成1×电泳液。一般不需要再调节pH，但保险起见，可以用pH试纸测试一下1×电泳液。高中低pH电泳缓冲液的pH分别是8.3，7.0和4.5。
 注意：中pH值的电泳液干粉只能配1x电泳液，否则不溶解。称取中pH电泳液(pH7.0)干粉A，5.52g,中pH电泳液(pH7.0)干粉B 1g混匀，加去离子水至彻底溶解，调PH7.0，定容至1L。客户根据可实际需要量按比例增减。
2．连接电极。如果浓缩胶和分离胶的pH高于目标蛋白pI，目标蛋白将带负电荷并向阳极移动，可以按标准的SDS-PAGE方法接通电极(上阴极下阳极)；如果浓缩胶和分离胶pH低于目标蛋白pI，目标蛋白将带正电荷并向阴级移动，此时应该下阴极上阳极。
3．300V预电泳直到电流不再降低(约需要30分钟)以去除残留过硫酸*(代"铵")。
4．换电泳液。
5．在液体蛋白质样品中加入5×上样液(16μl液体样品加4μL上样液)后上样。0.75 mm厚的胶可以上10μl，1.5 mm厚的胶可以上20μl。在未用加样孔中也要加1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意：如果用考染检测，每个孔的蛋白最好在50-100μg总蛋白，如果银染则只需要1ug即可。样品如果是蛋白质沉淀，可用1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液pH的残留成分(如蛋白质沉淀剂TCA)，用前最好用pH试纸测试一下，不在上样液的pH范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调pH。
6．上样自备的天然PAGE蛋白质标准或等电电泳的标准品(如果有的话)。
7．用15 mA(对0.75 mm厚的胶)或30mM(对1.5mm厚的胶)的电流电泳直到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要1-2小时。注意：电泳过程最好在冷室或有冷却系统，以免电泳产热使蛋白质变性。
8．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或酶活性检测)。