北京蛋白快速染色液促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京蛋白快速染色液促销在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京蛋白快速染色液促销
英文名：FastStain Protein Staining Reagent
品牌：百奥莱博
编号：WE0278
规格：500ml
  本产品采用独特的配方，可对电泳后凝胶上的蛋白质条带进行染色，而对凝胶本底几乎没有着色。染色过程仅需15分钟，染色后几乎不需要脱色。本产品灵敏度高，可检测到15ng BSA蛋白；若实验对检测灵敏度有较高要求，可将凝胶放置在染色液中2小时，可达到最大灵敏度(BSA：5ng)。

注意事项：
1、操作时请务必佩戴手套，如溅到皮肤上，请立即用大量水冲洗。
2、染色前的凝胶洗涤非常重要，否则会造成凝胶染色背景加深。
3、如染色后有轻微背景，可将染色后的凝胶用过量蒸馏水室温洗涤、脱色。
4、本产品适用于变性和非变性凝胶电泳后的蛋白染色。

操作步骤：

I 常规操作步骤：
1、常规PAGE电泳完成后，小心取下凝胶，根据凝胶的大小，将其放置在一个可微波加热的容器中。
2、加入足量的纯水，使凝胶可以在其中自由晃动，微波加热至沸腾。室温晃动2 min，彻底弃去水。
3、取20-25ml(以液面刚好覆盖凝胶为宜)凝胶染液加入到纯水洗涤后的凝胶的盒中，使其足以没过凝胶，轻轻晃动。并在微波炉中高火加热至沸腾，取出后室温轻轻摇动，5-10 min后凝胶中的蛋白条带开始显色，15 min后显色基本完成。
注意：此操作检测的灵敏度为：用BSA检测，灵敏度为15ng。若实验对检测灵敏度有较高要求，可将凝胶放置在染色液中2小时，可达到最大灵敏度(用BSA检测，灵敏度为5ng)。

II 快速助染步骤：
1、常规PAGE电泳完成后，小心取下凝胶，根据凝胶的大小，将其放置在一个可微波加热的容器中。
2、加入足量的纯水，使凝胶可以在其中自由晃动，微波加热至沸腾。室温晃动2 min，弃去水。
3、重复步骤2两次。
4、取20-25ml(以液面刚好覆盖凝胶为宜)凝胶染液加入到含纯水洗涤后的凝胶的盒中，使其足以没过凝胶，轻轻晃动后，微波高火加热至沸腾，取出后置于室温并轻轻晃动，5-10 min后凝胶中的蛋白条带开始显色，15 min后显色完成。
注意：此操作检测的灵敏度为：用BSA检测，灵敏度为5ng。

储存条件：室温

北京蛋白快速染色液促销极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·DNATrans转染试剂
编号：WE0255
英文名称：DNATrans Transfection Reagent
规格：500μl
  DNATrans是一种高效的阳离子脂质体转染试剂，适用于多种细胞的DNA转染。对于大多数细胞系包括原代细胞都有较高的转染效率，并且对细胞毒性极低。本转染试剂可应用于瞬时转染、稳定转染、共转染、高通量DNA转染，基因表达和基因功能研究。

实验前准备及重要注意事项
1、DNATrans Transfection Reagent使用前应先震荡摇匀。
2、转染效率与细胞密度有很大关系， 不同实验间应保持一个基本的传代步骤，确保转染时细胞没有长满或处于静止期。一般贴壁细胞转染的最佳细胞密度是80%-90%，悬浮细胞的最佳细胞密度为3-5×105细胞/ml，用于转染的最佳细胞度应根据不同的细胞类型或用途而异。
3、转染时不要在培养基中加入抗生素，否则会导致细胞死亡。

使用方法：
1、对于大部分的细胞系， DNA与DNATrans Transfection Reagent的比例在1:2至1:3时转染效率较高。为了提高转化效率、表达水平并且减少细胞毒性，实验应在细胞密度较大时进行转染。以下操作以24孔板每孔细胞的DNA转染操作为例。
a. 贴壁细胞：转化前一天，在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种0.5-2×105个细胞，待细胞长至80%-90%满时进行转染。
b. 悬浮细胞：在细胞转染之前，在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种3-5×105个细胞。
2、转染当天，首先准备转染复合物，对于每孔细胞按照以下用量配制：
a. 取适量DNA，加入25μl无血清培养基，并轻轻的混合均匀。
b. 取适量DNATrans Transfection Reagent，加入25μl无血清培养基，轻轻混匀，并于室温孵育5分钟。
c. 孵育5分钟之后，将稀释的DNA和稀释的DNATrans Transfection Reagent混合(使DNA以及DNATrans Transfection Reagent的终总体积为50μl)，轻轻混合均匀，并在室温下孵育20分钟(溶液可能会出现絮状，但不会影响转染效率)。
注意：该混合物在室温下可以稳定保存6小时。
3、将步骤1中24孔板中培养的细胞生长培养基更换成450μl无血清培养基，然后将步骤2中50μl转染复合物加入到24孔板内，轻轻前后推动24孔板以混匀。
4、将细胞置于含5% CO2，37℃条件下培养4-6小时后，更换成500μl生长培养基。
5、18-48小时后进行转染基因表达的检测。
6、对于稳定的细胞系：在转染24小时后，细胞按照1:10的比例传代，第二天可加入筛选培养基进行筛选。
注意：
1)该说明为一个24孔的用量，若同时转几个孔，配制转染复合物的量需加倍；若转染其他类型孔板，DNA和DNATrans Transfection Reagent用量见附表，该附表用量以293T细胞为转染细胞时的标准用量。
2)转染4-6小时后也可以不更换生长培养基，但由于DNATrans Transfection Reagent具有一定的细胞毒性，作用时间过长可能使某些细胞出现大量死亡现象，建议更换生长培养基。
3)优化条件：想要得到更高的转染效率，应优化转染条件：培养物、DNA浓度、细胞数和细胞与DNA复合物的孵育时间等条件都应进行优化。

附表：293T细胞转染参考数据

 

培养板	每孔表面积	铺板用培养基体积	DNA和稀释体积	DNATrans Transfection Reagent和稀释体积
96孔	0.3cm2	200μl	0.13μg至10μl	0.5μl至10μl
24孔	2cm2	500μl	0.8μg至25μl	2μl 至25μl
12孔	4cm2	1ml	1.6μg至50μl	4μl至50μl
35 mm	10cm2	2ml	4.0μg至100μl	10μl至100μl
6孔	10cm2	2ml	4.0μg至100μl	10μl至100μl
60 mm	20cm2	5ml	8.0μg至500μl	20μl至500μl
10 cm	60cm2	10ml	24μg至800ml	60μl至800μl

储存条件：2～8℃，避光


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·快速实时荧光定量PCR预混体系(低含量ROX校正染料)
编号：WE0142
英文名称：BaFaSYBR Mixture(Low ROX)
规格：5ml
  本品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品所含荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育20s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高PCR的扩增效率。该产品应用范围广，适用于普通和快速定量PCR程序，可适用于无需ROX校正的所有荧光定量PCR仪。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0141)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0142)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0143)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

组份	WE0141-5ml	WE0142-5ml	WE0143-5ml
2×BaFaSYBR Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaFaSYBR Mixture	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
3)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX.

2、PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	20 s
变性	95℃	3 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	30 s
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、20s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1分钟，以使起始模板充分解链。若高温处理时间过长，会对酶的活性造成影响。可根据模板情况确定最佳的预变性时间。
2)建议采用两步法PCR反应程序，退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


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