红色核酸染料(DNA染料)(RNA染料)

特别提示：包括红色核酸染料(DNA染料)(RNA染料)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：红色核酸染料(DNA染料)(RNA染料)
英文名称：Nucleic Acid Red(2000X)

产品货号：红色核酸染料(DNA染料)(RNA染料)
产品规格：1ml|5ml

本品是一种优于溴化乙锭（EB）的核酸染料，用于凝胶中DNA、RNA等核酸的染色，可替代升级SYBR Green。本核酸红染料具有安全(致突变性极低且检测不到显著的细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点，凝胶中的核酸在使用本产品染色后用适当紫外灯(300nm左右波长)检测呈现红色荧光，适用于原先使用EB为染料的凝胶成像系统。

本核酸红染料比EB和SYBR Green更安全。本核酸红染料在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性。艾姆斯氏试验(Ames test)结果表明，本核酸红染料的诱变性远小于EB。EB在多种致突变测试中呈现很强的诱变性，而本核酸红染料仅仅在浓度高达20微克/毫升时，并在S9代谢活化时有非常微弱的诱变性。通常本核酸红染料在凝胶中的工作浓度约为2微克/毫升，大大低于可导致诱变的浓度。本核酸红染料和百奥莱博的另外一种安全型核酸染料核酸绿色染料（YT016），由于它们特殊的化学结构使其难以进入细胞，从而大大降低甚至避免了染料的致突变性和细胞毒性。而SYBR Green染料可以穿透细胞膜，进入活细胞并染色DNA，并且有报道SYBR Green可以强烈增强紫外线诱导的基因突变。

本核酸红染料检测灵敏度高，对于小分子量核酸的染色效果好。本核酸红染料的检测灵敏度比EB高8-10倍，在检测低浓度、微量DNA或RNA方面比EB更佳，尤其对小分子量的DNA检测非常灵敏。在使用浸泡染色法时，本核酸红染料和SYBR Gold的灵敏度相近甚至更高；与SYBR Gold不同的是，本核酸红染料预先配制在凝胶中也有很高的灵敏度。EB对于小分子量核酸的染色效果差，而本核酸红染料对于小分子量核酸的染色效果很好，便于观察酶切或PCR获得的小分子量核酸片段。推荐使用的本核酸红染料浓度，其检测效果略优于EB。如果希望获得更高的染色灵敏度，可以适当提高本核酸红染料的工作浓度。

本核酸红染料的稳定性好，染色重复性高。含SYBR Green的凝胶核酸染色的重复性比较差，这通常是由于SYBR系列染料的稳定性差导致的。而本核酸红染料的稳定性很好，可以室温长时间保存及使用微波炉加热。本核酸红染料的光稳定性良好，可以在室内正常光线下操作而无需避光。由于其热稳定性和光稳定性，含本核酸红染料的凝胶在核酸染色时的重复性非常好。

本核酸红染料可以使用和EB相同的检测体系。本核酸红染料和EB的激发光和发射光都非常接近，可以直接用本核酸红染料替换EB，而不必更换已有的凝胶观察、拍照或成像系统(约300nm激发)。本核酸红染料的激发光谱和发射光谱请参考下图。


本品核酸红染料的激发光谱和发射光谱

本品可以按适当比例直接加入琼脂糖中配制成凝胶，也可以在电泳完毕后对凝胶进行染色。前者更加方便，而后者灵敏度要更高一些。但由于本品本身已经非常灵敏，通常采用把本品直接配制在凝胶中就可以了。对于一些特殊情况，如核酸样品量特别少的情况等，则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色。

本品对于核酸的迁移率影响非常小，小于SYBR Green对于核酸迁移率的影响。通过凝胶回收试剂盒（YT010）或酚氯*抽提，可以有效去除与DNA或RNA结合的红色染料，从而确保不会影响后续的连接、酶切、PCR、测序等常规的分子生物学用途。

储存条件：室温，避光，有效期一年。

注意事项:
1.本产品兼容常用的电泳缓冲液，例如TAE和TBE。
2.本品和EB一样，作为荧光染料均需避光保存，但在使用过程中的常规室内光照不会影响其使用效果。
3.制备好的本品琼脂糖凝胶，在4℃避光条件下通常可以保存3-5天。
4.本品琼脂糖凝胶再次熔化使用时，为取得更好的观察效果，需要添加适量本品。
5.电泳之后的凝胶不建议重复使用。
6.电泳后再使用本品染色的凝胶一般不需要脱色。如果发现背景太高，可以使用不含核酸酶的水进行脱色处理。
7.本品和核酸绿色染料（YT016）除了可以染色双链DNA外，也可染色单链DNA和RNA。本品对单链核酸的染色灵敏度约为对双链DNA染色灵敏度的一半。本品对单链核酸的染色灵敏度约为YT016的5倍。
8.如果使用聚丙*酰胺凝胶，请使用浸泡染色法染胶，并延长染色时间至30分钟-1小时。
9.如果观察到条带弥散或者分离不理想，建议使用浸泡染色法染色以确认是否与染料有关。如果浸泡染色法染色后仍然出现类似的问题，说明与染料无关，请尝试以下方法：使用新鲜配制的电泳缓冲液、降低核酸的上样量、降低染料的浓度、降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、降低电泳电压一倍以上并延长凝胶电泳时间以改善电泳效果、使用更薄的梳齿等。


除了红色核酸染料(DNA染料)(RNA染料),，我公司还供应以下相关产品：



名称：一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装
货号：BTN70606
规格：30次
尿素-聚丙*酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离200nt以下的小片段RNA，尤其是20nt左右的microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此我们公司开发了本产品。

产品特点：
1.一站式，含有电泳所需要的所有试剂，即开即用，十分方便，免去了实验人员称取有毒物品。
2. 灵活，可以根据需要配制各种浓度的Urea-PAGE，以便对长度各异的RNA进行电泳。
3.电泳后可直接用于UV观察、银染、胶回收、Northern杂交和放射自显影等。
4. 使用新型缓冲液，可以防止甘油的干扰。

产品组成：

成分	规格
尿素	210g
丙*酰胺	60g
甲叉双丙*酰胺	3g
TBE电泳液，10×	250ml
TEMED	1.5ml
过硫酸*(代"铵")(干粉)	1g
miRNAload	10ml
miRNA Marker	30次
固相RNase清除剂	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输、4℃保存(miRNAload、miRNA Marker需要-20℃保存)。保存期为一年。

使用方法：

一、准备工作
1. 用固相RNase清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制1 X电泳缓冲液：将适量的10X电泳缓冲液用RNase-free水稀释10倍，得到1X电泳缓冲液待用。
3. 配制10%过硫酸*(代"铵")溶液：精确称取约100mg过硫酸*(代"铵")到一干净的1.5mL离心管中，按每1mg过硫酸*(代"铵")加10μl RNase-free水的比例加入RNase-free水，摇晃致溶，立即使用。注意：放置时间不要超过一周。

二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积，一般配制一块13cm×15cm×0.8mm的胶需要15mL凝胶溶液，配制一块36cm×45cm×0.8 mm的胶需要120mL凝胶溶液。
2. 根据所需要的凝胶溶液的体积，在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分(此处以配制100mL浓度为15%的凝胶为例):

成分	终浓度	用量
尿素	7M	42g
40% Acrylamide/Bis溶液	15%	37.5mL
10×电泳缓冲液	1×	10ml
补RNase-free水到100mL

注：Acrylamide/Bis的终浓度需要根据待分离RNA长度选择(见下表)。
 

需分离的RNA长度范围	Acrylamide/Bis工作浓度
6-100nt	20%
25-150nt	15%
40-200nt	12%
60-400nt	8%
80-500nt	5%
1000-2000nt	3.5%

3. 搅拌并加热到40-50℃左右，直到尿素完全溶解。
4. 冷却到室温后，将三角瓶接上真空系统抽真空处理10-15分钟以充分去除溶液中的氧气(氧气会降低聚合反应效率)。但如果实验条件有限，此步也可以省略。
5. 边摇晃溶液变加入50μl TEMED和500μl 10%过硫酸*(代"铵")。注意：即使选择其他工作浓度的Acrylamide/Bis，TEMED和10%过硫酸*(代"铵")的用量也不需要随之改变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化，TEMED和10%过硫酸*(代"铵")的用量也要按比例改变。
6. 再充分摇晃约30秒后迅速灌胶，然后插入样品梳。
7.室温放置30-60分钟使胶凝固。
8. 将凝胶板放置在电泳装置上后，在上下层分别加入适当量的1×电泳缓冲液。如果不马上使用，需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
9. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液，充分将每个加样空中未聚合的Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。

三、电泳
1.在上样前，预电泳 20-30分钟以使多余的过硫酸*(代"铵")跑出加样空，同时还可以使凝胶的温度升高(到 50℃左右)，有利于RNA电泳时维持在变性状态。预电泳电流见下面第 5 条。
2. 将miRNA样品与等体积的miRNAload 混合，70℃保温 2-3分钟后迅速放置在冰上冷却，快速离心半分钟，放冰上待用。
3. 关电泳仪后开始上样。注意：每次上样后如果不更换枪头，则需要充分吹打洗净枪头以防样品的交叉污染。
4. 同时上样 miRNA Marker。
5. 重开电泳仪，对 13cm×15 cm的胶，以20-30mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止；对 36cm×45cm的胶，则以50-60mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止。

四、后续处理
1.染色观察：将凝胶一面的玻璃板揭开，直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行各种染色，包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每100mL 1×TBE中加 20μL 10mg/mL的EB溶液)、我们公司低毒核酸染料 DNAgreen(每100mL 1×TBE中加10μL DNAgreen 原液)。UV下观察并拍照。
2. miRNA回收：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后进行胶回收处理。
3. Northern杂交：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后电转移到带正电的尼龙膜上，然后进行杂交处理。
4. 放射自显影：如果miRNA样品电泳前经过同位素标记，则将凝胶一面的玻璃板揭开，用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来，然后包上保鲜膜，真空抽干，然后使胶跟X光片向对置进行放射自显影。