支原体检测试剂盒

特别提示：包括支原体检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：支原体检测试剂盒
英文名称：Mycoplasma Detection Kit

产品货号：支原体检测试剂盒
产品规格：100T-200T

本试剂盒是利用荧光染料检测支原体污染。这种染料会结合到DNA的A-T富集区域，因为支原体的DNA中A-T含量高(55％～80％)，所以可将其染色而被检测到。被支原体污染的细胞经染色后在细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点，即为支原体的DNA染色斑，说明有支原体污染。Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm;Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。

操作步骤：

贴壁细胞：
1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中，接种密度为1-2×104。同时，接种正常无支原体感染的同种细胞，作为阴性对照。
2.5天后，先吸去培养液，再加入1ml的固定液，静置20min，
3.吸去固定液，晾干。
4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞)，37℃避光放置15-20min或室温静置20～30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后加入一滴封片液，并以盖玻片覆盖。
6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。

悬浮细胞：
1.收集需检测的细胞，1500rpm，5min。
2.将收集的细胞涂片于载玻片上，再加1ml的固定液，静置20min。
3.吸去固定液，晾干。
4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞)，37℃避光放置15～20min或室温静置20～30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液，用无菌水洗涤玻片3次，直接风干。风干后加入一滴封固液，并以盖玻片覆盖。
6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。

结果判断(参考)：
阴性：仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。
阳性：除细胞外，细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。

注意事项：
1.Hoechst工作液对人体有害，请注意防护。
2.固定液有刺激性气味，建议在通风橱进行固定。
3.支原体检测时，最好用不含抗生素的培养液培养2～3代，这样容易避免假阴性结果。
4.本试剂盒用于6孔板检测时，可以进行50次检测反应。
5.检测支原体污染，可以使用支原体高效Vero细胞，这样可以提高检测灵敏度，即将被检测样品接种于Vero细胞进行检测。

储存条件：4℃避光，有效期2年

除了支原体检测试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：TUNEL检测阳性对照制备试剂盒
货号：YT134
规格：10次
本试剂盒可以用于TUNEL检测阳性对照的制备，制备后的阳性对照可以用于一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(YT135)的荧光，也可以用于显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(YT137)的显色检测。DNase I可以剪切基因组DNA，使基因组DNA产生片段化(fragmentation)。基因组被片段化的细胞在用TUNEL法检查时会呈阳性染色。本试剂盒足够制备10个阳性对照。

试剂盒组份：
DNase I—————————10μl
Reaction Buffer(10X)——200μl

注意事项：需自备用于TUNEL检测的组织切片、或培养细胞的片子。需自备TUNEL检测试剂盒。

储存条件：-20℃。

名称：DNA ladder 22000
货号：SNM516
规格：60T

名称：Annexin V-FITC/PI双染 细胞凋亡检测试剂盒
货号：SNM530
规格：50T|20T|10T

名称：TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(荧光及显色法，石蜡切片)
货号：SNM533
规格：50T|20T

名称：TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(荧光及显色法，通用型)
货号：SNM534
规格：50T|20T

名称：TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(显色法，石蜡切片)
货号：SNM537
规格：50T|20T

名称：Annexin V-APC/PI双染双染细胞凋亡检测试剂盒
货号：KFS191
规格：20T|100T|50T
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素APC 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V- APC 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。

注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-APC/PI 避光保存及使用。
3. PI 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

名称：细胞增殖与示踪检测试剂盒
货号：SY0509
规格：500T
CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 是基于CFDA, SE对细胞进行示踪及增殖检测的试剂盒，由CFDA,SE粉末、溶剂及相关细胞染色缓冲液组成，该试剂盒主要工作原理为：CFDA, SE具有细胞膜渗透性，本身不具有荧光发光性。当通过被动运输穿透细胞膜进入活细胞后，可被胞浆内的酯酶催化生成羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester, CFSE），后者可发强烈的绿色荧光，不能穿透细胞膜，能完好的保留在胞内。CFSE还可自发性并不可逆地与细胞内的氨基结合从而偶联到细胞蛋白质上，同时过量且未被偶联的CFDA, SE通过被动扩散回到细胞外培养基内，被后续清洗步骤所清除。经CFDA, SE标记的非分裂细胞的荧光非常稳定，稳定标记的时间可达数月，因此非常适用于细胞群落分析。

CFDA, SE标记细胞的荧光非常均一，优于以前使用的其他细胞示踪荧光探针如PKH26，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中，CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪（FL1通道）根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次（1/2的荧光强度），二次（1/4的荧光强度），三次（1/8的荧光强度），以及更多分裂次数的细胞。CFSA，SE可检测分裂次数多达八次甚至更多。经CFDA, SE标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。CFDA, SE最常用于淋巴细胞的增殖检测，也可用于成纤维细胞，自然杀伤细胞，造血祖细胞等其他细胞的增殖检测。

CFDA, SE标记细胞呈绿色荧光，Ex=494nm，Em=521nm，除了流式细胞仪检测细胞增殖外，还可用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。

本品为CFDA，SE细胞增殖与示踪检测试剂盒，包含配制CFDA，SE储存液所需的溶剂和细胞标记用的染色缓冲液，简化了实验前期准备工作。另，CFDA,SE标记细胞一般15min即可完成，对于不同细胞，需要自行摸索最佳标记时间。按照每个样本的标记体积为2ml计算。

注意事项
1）CFDA,SE易被水解，在水溶液中会很快变质。因此保存过程中粉末或者储存液都需干燥保存；而且使用过程中避免接触水。但在标记细胞的过程中和水接触是在许可范围内的。
2）CFDA,SE溶剂在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，于20-25℃水浴温育片刻至全部融解后方可使用。
3）不同的细胞其细胞内酯酶活性不同，因此染色效果具有差异性。
4）虽然本试剂盒已对CFDA,SE染色体系做了优化处理，但建议使用者根据自身的细胞类型，培养条件以及应用的不同来梯度摸索最佳的工作浓度，以最低浓度得到适宜的标记效率为准。
5）荧光染料均存在淬灭问题，染色过程需尽量避光。
6）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃，有效期1年