CCK-8细胞增殖与毒性检测试剂盒(WST-8法)

特别提示：包括CCK-8细胞增殖与毒性检测试剂盒(WST-8法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：CCK-8细胞增殖与毒性检测试剂盒(WST-8法)
英文名称：Cell Counting Kit-8

产品货号：CCK-8细胞增殖与毒性检测试剂盒(WST-8法)
产品规格：100次|500次|2500次|10000次

本试剂盒是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞 毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。

WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成 橙黄色的formazan(参考下图)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关 系。



WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可 以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳 定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高。

WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。

本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒 性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作 。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于 大批量样品的检测。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。

WST-8对细胞无明显毒性。加入CCK-8溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵 活，便于找到最佳测定时间。

注意事项：
1. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈 最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸 发。
2. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测，如果待检测体系 中存在较多的还原剂，需设法去除。
3. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

储存条件：4℃，有效期一年。

除了CCK-8细胞增殖与毒性检测试剂盒(WST-8法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
货号：BTN140634
规格：500次
MTS是一种新型甲臜化合物，和MTT同属四唑氮衍生物。MTS能被活细胞里的线粒体脱氢酶降解而产生棕黄色水溶性的甲臜，通过测定甲臜的光谱吸收，进而可以测定细胞的增殖情况。原理如下：


产品特点：
1．本试剂盒是单溶液式细胞增殖与细胞毒性检测试剂，主要成分包含MTS和一个电子耦合试剂，溶液的稳定性强，反应的灵敏度高。
2．操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时，无需洗涤或收获细胞，免去溶解步骤。
3．无放射性。不需要配制液闪混合物，也不需要处理废弃物。
4．与MTT相比，使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。
5．操作灵活，与MTT不同，平板读数后可放回温箱继续孵育，使颜色进一步生成。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期半年。

使用效果：
96孔板中加入细胞100μL/孔(约1×104)，37℃，5% CO2细胞培养箱培养24小时，加入适当浓度的受试化合物。培养箱中孵育适当时间，每孔中加入10μL的MTS细胞增殖及毒性检测溶液。37℃孵育1-4小时。490nm波长检测光密度。

备忘录：
1．细胞的存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值(完全培养基加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)或空白药物孔OD值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)，各重复孔的OD值取均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。
细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
2．求出T/C = 50%时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

名称：Caspase-6活性检测试剂盒(分光光度法)
货号：SNM512
规格：100T|50T|20T

名称：DNA ladder 600
货号：SNM521
规格：60T

名称：Caspase 9分光光度法检测试剂盒
货号：KFS206
规格：20T|50T|100T
本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织caspase-9 检测。Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用。Caspase-9 是级联酶的上游分子，可被线粒体向细胞质释放的细胞色素C 激活。激活的Caspase-9 可引起下游级联酶的活性，如Caspase-3。Caspase-9 在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段时则被激活。Caspase-9 分光光度法检测试剂盒就是将caspase-9 序列特异性的多肽偶联至发色基团，当该底物被caspase-9 剪切后，发色基团即游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，可考察caspase-9 的活化程度。

注意事项
1. Caspase-9 Substrate 避光保存及使用。
2. 对某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖于Caspase-9 活化的机制，这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-9 活性无明显改变，需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
3. 细胞数量需达到3～5×106 个或新鲜组织50-100mg，以便能达到测定需要的100～200μg 蛋白的要求，因为Caspase-9 的活性与细胞裂解液的蛋白含量有关，如测定的OD 值偏低，可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。

名称：细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI)
货号：SY0472
规格：20 rxn
Annexin V-EGFP/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit）是用EGFP标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被EGFP 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

产品组份：
Annexin V-EGFP———————100 μl
PI Staining Solution————100 μl
1×Binding Buffer——————8 ml

注意事项

1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-EGFP的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞，比如在检测凋亡的同时检测细胞周期，只能选用Annexin V-FITC，而不能选用Annexin V-EGFP，因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定前需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育，并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片，可以和Annexin V结合，对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-EGFP和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

储存条件：4℃，有效期一年。