
总外泌体捕获和定量试剂盒(血清)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商:
上海信裕生物科技有限公司
- 规格:
1
外泌体是由细胞分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能,在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子;然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。宇玫博生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒,组分经过优化处理,适用于血清、血浆中的外泌体提取,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒,可用于电镜分析、NTA粒径分析、蛋白分析研究等。
产品组成
| 组分名称 | 规格 |
| Blood IsoExo Solution*(BIS) | 100 mL |
| *RNase/DNase Free, Sterile |
1,高速离心机 (可以达到10000 g离心力),2 mL离心转子,1.5 mL离心管;
2,1×PBS缓冲液(无菌);
总外泌体捕获和定量试剂盒(血清)操作规程
一、样品预处理
1,取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上;
2,样品初始用量:(单次提取时的样品量)
| 样品名称 | 最低量 | 最高量 |
| 血 清 | 0.2 mL | 1 mL |
| 血 浆 | 0.2 mL | 1 mL |
4,上清液转移:去除细胞碎片的离心上清液转移到新的离心管中;
5,离心去杂质:转移后的上清液于4℃以10000 g离心20 min,去除样品中杂质,将离心后的上清液转移至新的离心管中。
二、总外泌体捕获和定量试剂盒(血清)提取外泌体
1,上清液预处理:在去除杂质的离心上清液中加入Blood IsoExo Solution (BIS)试剂,具体的加入剂量如下:
| 样品名称 | 样品剂量 | BIS剂量 |
| 血 清 | 0.2 mL | 1 mL |
| 血 浆 | 0.2 mL | 1 mL |
2,溶液混合:加入ECS试剂后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀1 min,再放置于2℃至8℃静置2h;
3,沉淀外泌体:取出装有混合液的离心管于4℃以10000 g离心60 min,弃上清,沉淀中富含外泌体颗粒;(注:尽可能吸净上清液)
4,外泌体重悬:取50 μL 1×PBS均匀吹打离心沉淀物,待其均匀悬浮在PBS中后,将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中;(建议PBS液加入体积:初始样本体积=1:4)
5,总外泌体捕获和定量试剂盒(血清)收获外泌体颗粒:将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12000 g离心2 min,保留上清液,该上清液中富含外泌体颗粒。
6,外泌体的保存:提取后的外泌体保存于-80℃低温冰箱中,以备后继实验使用。
储存条件
本品在室温可稳定保存24个月,使用前请充分混匀。
注 意
本产品仅用于生命科学研究,不得用于医学诊断及其他用途!
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文献和实验1、外泌体提取纯化试剂盒如何保存? 室温保存(10℃~30℃),无需低温保存。温度过低时 ECS 试剂会出现冻结状态,此时用 65℃ 水浴 1 h 进行解冻即可。 2、外泌体提取纯化试剂盒能否分离纯化 200-1000 nm 直径的囊泡? 不能,本试剂盒不适用于直径大于 200 nm 囊泡的分离。粒径在 200 nm 以上的属于大囊泡,而非外泌体。 3、样品在提取外泌体之前是否可以低温保存? 可以。长期保存请放置于 -80℃,无需加冻存液;短期保存(1-2 天内)则放置于 4℃ 即可
第一步细胞培养:外泌体来自于细胞,必须先从源头抓起,高质量的细胞及上清液产出高质量的外泌体。 收集上清的细胞培养原则:在细胞健康正常生长的前提下,尽可能的减少血清外泌体或是不使用血清。 培养条件 优点 缺点 1 含血清的完全培养基 ✘ 血清中含有大量异源外泌体 2 含去外泌体血清的培养基 ✔ 营养相对丰富 去外泌体血清难以做到 100% 的去除的,因此即使 1% 的血清外泌体残留也带来大量的异源外泌体 3 基础培养
细胞来说要少很多。 最后,针对细胞上清液的外泌体的提取。这个是老生常谈的问题,这里就不再多讲了。如果实验室有超速离心机的话,那就使用超速离心的方法,按照前文建议的预处理操作后,超离后的沉淀也会增加的,同时外泌体的质量也会提升。如果实验室没有超离的情况下,也可以通过试剂盒的方法来提取,除了进口品牌外,也可以使用一些国产试剂盒,质量也不亚于进口品牌的。 总结一下,为了获得高质量的外泌体:需要在细胞培养时减少正常血清的使用,推荐去外泌体血清或者外泌体专用无血清培养基;收获
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