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- 上海烜雅
- XY-MY-1049
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- 2025年07月30日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
100
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
20
蛋白提取试剂盒-I (实体组织和细胞蛋白抽提)详细信息
蛋白提取试剂盒-I (实体组织和细胞蛋白抽提)产品及特点：
石蜡包埋组织是很重要的临床材料，研究其正常细胞和疾病相关的细胞，特 别是癌细胞中标记蛋白的差异表达水平，对于判断癌化的进展，癌症的类型的判 定，以方便于诊断和治疗有重要的意义，然而体外培养的细胞的蛋白差异表达水 平并不能够真实反映体内细胞的真实状况，因此从石蜡包埋组织中提取蛋白并且 加以研究有很重要的意义，本试剂盒通过特殊的快速脱蜡试剂和蛋白质抽提试 剂，在两种不同的温度条件下温育，可以将被铰链的蛋白质释放出来，经过简单 的离心步骤，上清中含有的蛋白经过沉淀洗涤和溶解后，可以用于Western Blot 、SDS-PAGE、ELISA、2D电泳或蛋白质芯片分析等，本试剂盒可以使 用50次左右。
本产品有下列特点：
- 不含有去污试剂，适用于非染色的标本。
3. 不需要超速离心，可以同时处理多个标本。
规格及成分 ：
预处理试剂 A 100 mL
预处理试剂 B 5 mL
提取试剂 5mL
沉淀试剂 75mL
DTT 干粉 80mg
使用手册 1份
运输及保存：
常温下运输和保存，但 DTT 和提取试剂需要 4℃保存，盛装预处理试剂 A 的瓶 子已经密封，请在使用后，将剩余的预处理试剂 A 倒入一个有内盖的瓶中，同 时盖紧内外盖，以防止挥发。盛装预处理试剂 A，B 和沉淀试剂的瓶盖要盖紧， 同时避免火源。
自备试剂：超纯水
使用方法：
- 取两块大约10-15 μm厚，100 mm2石蜡包埋组织切片到1.5 mL 的干净离心管中，加入1mL 预处理试剂A，高速涡悬震荡30 sec，室温静置5 min， 期间偶尔颠倒离心管数次。
- 加入100 μL预处理试剂B，涡悬震荡10 sec，再10000 rpm（10000 g）离心2 min，移去上下两层的液体。
- 用500 μL的超纯水清洗脱蜡的组织两次，离心并尽量吸去液体，保留组织 块沉淀。
- 加入100μL提取试剂（用前需要将DTT全部加入到装提取试剂的瓶中，摇晃 混匀，未用完的提取试剂需要4℃放置），盖上盖子，涡悬震荡数秒。 5. 在水浴锅中100℃加热20 min，短暂离心一下，再用组织研磨棒将切片组 织磨碎。
6. 在水浴锅中60℃加热2 hour，期间大约每20 min取出，震荡一次。
7. 4℃，12000 rpm（12830 g）离心15 min，小心将上清转移到一个新的 1.5 mL 的干净离心管中。注意：在上清中的蛋白质可以在4℃的环境条件 下保存一个星期，如果需要长期保存，请放置在-20℃的环境中，同时避免 反复冻溶，也可以使用我公司生产的非干扰型蛋白浓度测定试剂盒对上清中 的蛋白质直接定量。
8. 加入1 mL 的沉淀试剂，涡悬震荡10 sec，在4℃的环境中保持10 min。 9. 4℃，12000 rpm离心15 min，去除上清，保留沉淀。
10. 加入0.5 mL的沉淀试剂，涡悬震荡10 sec，在4℃的环境中保持10 min， 再4℃，12000 rpm离心15 min，去除上清， 保留沉淀，在通风橱中将试 管倒置在滤纸上，让残余的液体挥发干净。
11. 将固体沉淀溶解于合适的自备的缓冲液中，再4℃，12000 rpm 离心5 min，收集上清，用于SDS-PAGE，Western blot等实验。注意：此上清 中含有DNA，RNA 残留，所以溶液有些发粘，加入少量的micrococcal nuclease，benzonase 等消化，有助于减少粘性，但是即使不处理一般不 会影响后续实验，用枪头将沉淀捣碎。建议使用含有Thiourea ，Urea， NDSB-201 或其它强溶解能力的去污试剂的缓冲液有利于沉淀的完全溶 解。
注意事项：
1. 为提高石蜡包埋组织中蛋白质的回收效率，必须尽量减少在切片制作过程中 甲醛固定时间，同时在石蜡包埋前彻底脱水， 甲醛固定的时间越长，蛋白 质的提取回收效率越低。
2. 尽量取用从石蜡包埋组织块中切取的薄片，或没有封闭到载玻片上的没有经 过染色的切片。
3. 材料越新鲜或甲醛固定时间越短，蛋白质的回收效率越高。
4. 提取试剂中含有含有刺激性的化合物，操作时要戴好乳胶手套，避免沾染皮 肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻，沾染皮肤 眼睛后，立即用清水或生理盐 水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
5. 对于甲醛浸泡的组织样本，每次可以取5-10 mg的组织样本，用双蒸水洗涤 离心收集后后，直接从步骤4开始操作。
6. 提取的蛋白沉淀如果用于ELISA、RIA等免疫实验，可能需要先进行抗原修 复程序，但是如果用Western Blot或Dot blot实验，一般情况下没有必要。
7. 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等， 由此产生的后果概不承担责任
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