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- 上海烜雅
- XY-MY-1043
- 国产/进口
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
TRIquick
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
20
TRIquick_总RNA提取试剂是一种通用的总RNA提取试剂，适用于动植物细胞或组织及细菌的总RNA抽提，可有效防止RNA在提取过程中的降解。获得的RNA可直接用于Northern杂交，纯化mRNA，体外翻译，RNase保护实验，RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作。该试剂可用于100次总RNA提取（10平方厘米细胞或100mg组织）。
操作说明:
自备新开封或专用chloroform，Isopropanol，75%乙醇，DEPC处理水。
1. 细胞裂解或组织匀浆：
1)贴壁细胞：吸尽培养液，每10平方厘米（6孔板孔或35 mm平皿）细胞加入1 ml TriQuick Reagent,使其覆盖培养细胞，再用吸管或加样器吹打2~3次，细胞应完全裂解，然后转移至离心管中。
2)悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每五百万至一千万（5×106-1×107）动植物或酵母细胞，或一千万 (1×107)细菌，加入1ml TriQuick Reagent 。用吸管或加样器吹打，使其完全裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，以确保其完全裂解。转移至离心管中。
3)组织：先将组织剪切成小块，放入玻璃匀浆器内。冷冻组织可在研钵中研磨匀浆。每50-100mg组织加入1ml TriQuick Reagent ，匀浆至完全裂解。转移至离心管中。
裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。室温放置5分钟。对于多糖、蛋白等杂质丰富的组织样品，匀浆后仍会存留有不溶物质，可12000g 4℃离心10分钟，然后吸取上清至一新的离心管中。
2. 分离：在装有裂解物的离心管中加入0.2倍体积的chloroform（1 ml TriQuick Reagent 加入0.2 ml chloroform），振荡器上充分振荡混匀30秒，室温放置2-3分钟。12000g 4℃离心10分钟，然后吸取含总RNA的上层水相至一新的离心管中，每毫升TriQuick Reagent 约可吸取0.5-0.6 ml。有机相和中间层含有DNA和蛋白质，应避免触及。
3. 沉淀：按每毫升TriQuick Reagent 加入0.5 ml Isopropanol，颠倒数次混匀，室温沉淀10分钟。12000g 4℃离心10分钟，在管底可见RNA沉淀。弃上清，按每毫升TriQuick Reagent 加入1 ml 75%乙醇，轻轻颠倒混匀，以清洗RNA沉淀。12000g 4℃离心2分钟，弃去液体，小心勿丢弃RNA沉淀。室温倒置晾干5~10分钟。
4. 溶解：加入适量DEPC处理水使RNA沉淀溶解。存放于-80℃。
注意事项：
1，RNA提取过程中所用器皿、离心管、吸头等应保证无污染无RNA酶。操作中应小心，防止外源性RNA酶污染样品导致RNA样品降解。 2，试剂中含有酚等有害物质，注意个人防护。
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文献和实验实测植物总RNA提取液套装提取土豆、桑叶中的RNA 一直以来，搞植物研究的同学们对Trizol试剂提取植物RNA诟病不断，在这样的背景和需求下，我们特别研发了植物总RNA提取液套装，套装中除了植物总RNA提取液外，还包括了Buffer EX(氯仿替代品)，RNA沉淀液（异丙醇替代品）以及β-巯基乙醇。真可谓一个套装在手，提取植物RNA无烦恼！现在我们特别选择了土豆块茎（Trizol试剂提取失败）和桑叶（Trizol试剂提取效率极低）两个典型样本实测植物总RNA提取液套装的效果。 实验目的
在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA 制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA 时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase 的作用。 1. 提取组织RNA 时，每50～100mg 组织用1ml Trizol 试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA 时，先离心沉淀细胞，每5-10 �106 个细胞加1ml Trizol 后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞； 2. 将上述组织或细胞
问：请问大家提取酵母的总RNA都用什么方法？有好用的试剂盒吗？酵母总RNA提取应该注意什么？答：使用热酚法抽提酵母RNA,很好用，至今没有失败过。(1) 将酵母细胞培养在3ml选择性培养基中，30℃过夜旋转培养。(2) 稀释过夜培养的菌液，重新在10ml培养基中培养细胞。(3) OD600达到1.0时，收菌，4000rpm/min离心5min,弃培养基。(4) 将细胞悬浮于400μl AE缓冲液（50mM Sodium Acetate,10mM EDTA 调整pH值至5.2
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