T4 DNA连接酶CAS号：9015-85-4

T4 DNA连接酶CAS号：9015-85-4产品规格:
GR：优级纯。主成份含量很高、纯度很高，适用于精确分析和研究工作，有的可作为基准物质.
AR：分析纯。主成份含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。
CP：化学纯。主成份含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。
LR：实验纯。主成份含量高、纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于一般化学实验和合成制备。
BR：生化试剂。用于配制生物化学检验试液，和生化合成。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂和有机合成。
BS：生物染色剂。适用于配制生物标本染色液。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂和有机合成。
Ind：显色剂。
HPLC：适用于高压液相色谱的试剂。
T4 DNA连接酶CAS号：9015-85-4
英文名称：T4 DNA Ligase  
CAS号：9015-85-4  
分子量：55.3kDa，单体  
级别：BR  
来源：含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌  
活性定义：是指在ATP-PPi交换反应中，37℃、30分钟内将1nmol [32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量（weiss单位，1个weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。1个粘性末端连接单位：20ul反应体系（50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端）中，在16℃、30分钟内连接50%连接HindIII酶切的Lambda DNA 产物所需的酶量）抑制剂：
当反应体系中NaC1或KC1的浓度超过200 mM时，可强烈抑制T4 DNA Ligase活性  失活：
65℃加热10分钟或70℃加热5分钟  注意：T4 DNA Ligase与DNA结合会改变条带的琼脂糖凝胶电泳迁移率，为避免此现象，电泳前需处理样本或分子量标准。样本处理如下：样本与Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加热5分钟或65℃加热10分钟后冰浴保存；转化时，连接产物的体积不得超过感受态细胞体积中的10%；电转化之前，先用氯抽提方法除去连接混合物中的T4 DNA Ligase，然后经乙醇沉淀纯化抽提产物
质量控制：测试表明无内切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能检测：粘性末端或平末端DNA的连接能力性状(以下信息仅供参考)：
液体。该酶催化双链DNA或RNA中毗邻的5'磷酸基团和3'-羟基末端之间形成磷酸二酯键，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA复合体中的单链切口，连接DNA的粘性和平末端，但该酶对单链核酸无酶活性。该酶需要辅因子ATP  用途：
本品仅供科研，不得用于其它用途。(以下用途仅供参考)粘性末端或平末端双链DNA的连接；双链寡核苷酸接头与双链DNA连接；双链DNA、RNA或DNA-RNA复合体中缺口的修复；连接酶介导的RNA检测；位点特异性突变；扩增片段长度多态性  保存：
-20°C  
T4 DNA连接酶CAS号：9015-85-4优质的仪器用水
优质的仪器用水是使用好检验试剂的一个十分重要环节之一。因为测定离子类的项目：比如铜、铁、锌、Mg、磷。
这些项目在使用过程中，仪器用水的质量相当重要，虽然现在一般医院的生化仪都带有制水系统，但制水系统基本都是制备去离子水，离子交换树脂在使用一段时间后交换能力明显下降，需要定期进行更换，否则制备的水离子含量多，电导率偏高。使用含离子超标的水冲洗仪器，直接影响检验结果。再如二氧化碳项目，如果水质不好，仪器用水中本身含二氧化碳就很高，则检测该项目的结果也会受到严重的影响。还有如果血清中含有GLDH，而仪器用水存在时，可消耗NADH，使利用NADH的酶联连续监测法结果偏高。解决办法：定期监测水质，当仪器用水的电阻小于1．0MQ时要更换离子交换树脂或活性炭。
2 标本的及时分离及测定
标本的及时分离及测定是用好检验试剂的首要环节因为凡是利用NADH转化为NAD 变化率来检测其物质含量的试验都或多或少受到血液存放时间的影响。原因是全血存放时间越长，红细胞利用血清中的糖进行无氧酵解产生酸使NADH转化为NAD ，这样使测定结果假性升高。解决办法：①作好与临床的沟通，对抽血人员和标本运送人员(传递人员)进行培训；② 及时分离血清并及时检测；③ 也可将全自动生化分析仪上的延迟时间设置大于60秒，这样试剂在延迟期内消除酸的干扰，可完全避免假阳性结果的出现。
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T4 DNA连接酶CAS号：9015-85-4混成单一试剂的问题
比如酶法肌酐试剂，第一步R1中的酶要消除样品中内源性肌酸的干扰，如果混成单一试剂，则会使检测结果偏高，消除法HDL、LDL也不能混成单一试剂，因为它们都要分别清除HDL和LDL以外的脂蛋白，从而达到检测的目的，如果混成单一试剂，则会使测定的HDL和LDL不准确。另外，有的试剂混成单一试剂后，稳定性和抗干扰能力也会明显下降。解决办法：①在仪器通道或试剂位允许的情况下尽量使用双试剂；②如一定要使用单一试剂，最好选择试剂厂家针对部份项目专门生产好的单一试剂。
T4 DNA连接酶CAS号：9015-85-4试剂开瓶的问题:
随着全自动生化分析仪的普及，“开瓶稳定性”也随之受到了大家的重视，但是就目前有的试剂方法学来讲，还达不到人们所要求的试剂开瓶后在仪器内放很长时间不需要定标，比如ALP、TP、GSP等PH为碱性的试剂，开瓶后试剂会吸收空气中的二氧化碳，使试剂本身的PH值下降，如果长时间开瓶不定标或校准，会使检测结果发生偏离，在国外有的项目有明文规定，必须72小时之内定标，比如BUN。但是在国内的某些实验室为了方便，很长时间都不作校准，导致测定结果的不准确。解决办法：了解试剂的特性，及时对部份项目进行校准，对于每天标本量不多的医院，可按1～2天的用量取用试剂放入仪器。