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- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
58
- 英文名：
Con A Sepharose 4B
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海抚生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
详见说明书
GR：优级纯。主成份含量很高、纯度很高，适用于精确分析和研究工作，有的可作为基准物质.
AR：分析纯。主成份含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。
CP：化学纯。主成份含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。
LR：实验纯。主成份含量高、纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于一般化学实验和合成制备。
BR：生化试剂。用于配制生物化学检验试液，和生化合成。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂和有机合成。
BS：生物染色剂。适用于配制生物标本染色液。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂和有机合成。
Ind：显色剂。
HPLC：适用于高压液相色谱的试剂。
Con A琼脂糖凝胶4B
英文名称：Con A Sepharose 4B
其他名称：拌刀豆球蛋白琼脂糖凝胶4B
级别：BR
特点：基团脱落少，结合特异性强
基质：4%交联琼脂糖凝胶
配基：Con A
配基密度：10～18mg/ml
载量：20～50mg甲状腺球蛋白
粒径：45～165um
最大流速：300cm/h
PH范围：4～9
亲和介质使用：
1、装柱：该介质凝胶从4℃冰箱中取出后最好在室温下缓慢振摇恢复到室温，然后再装柱，以免产生气泡影响柱效。
2、平衡：结合缓冲液（Binding Buffer）为20mmol/LTris-HCl缓冲液，pH7.4，其中含1mM MnCl2，1mM CaCl2，0.15M NaCl。由于介质保存液含有20%乙醇，因此装好柱的介质必须进行平衡。平衡介质所需的液体约为10个柱床体积。由于凝集素和糖基结合强度弱，为促进糖基结合，清洗缓冲液中可以不含有0.15M NaCl。
3、吸附：预分离组分经过结合缓冲液透析后进行上柱吸附。
4、清洗：待预分离组分已经都进入介质中后，加入清洗液体，洗去非特异吸附蛋白，大约5-10倍柱体积。
5、洗脱：可以用0.1-0.5M糖类进行线性或梯度洗脱，例如用α-甲基-D-甘露糖苷(α-D-methylmannoside)，或α-甲基-D-葡萄糖苷(α-D-methylglucoside)，缓冲液为20mmol/L Tris-HCl缓冲液，pH7.4，并含有0.15M NaCl。强结合组分可以采用低pH值（但不得低于pH3）缓冲液 ,即用0.1M,pH6.5的缓冲液进行洗脱。
亲和介质再生：
Con A琼脂糖凝胶4B优质的仪器用水
优质的仪器用水是使用好检验试剂的一个十分重要环节之一。因为测定离子类的项目：比如铜、铁、锌、Mg、磷。
这些项目在使用过程中，仪器用水的质量相当重要，虽然现在一般医院的生化仪都带有制水系统，但制水系统基本都是制备去离子水，离子交换树脂在使用一段时间后交换能力明显下降，需要定期进行更换，否则制备的水离子含量多，电导率偏高。使用含离子超标的水冲洗仪器，直接影响检验结果。再如二氧化碳项目，如果水质不好，仪器用水中本身含二氧化碳就很高，则检测该项目的结果也会受到严重的影响。还有如果血清中含有GLDH，而仪器用水存在时，可消耗NADH，使利用NADH的酶联连续监测法结果偏高。解决办法：定期监测水质，当仪器用水的电阻小于1．0MQ时要更换离子交换树脂或活性炭。
2 标本的及时分离及测定
标本的及时分离及测定是用好检验试剂的首要环节因为凡是利用NADH转化为NAD 变化率来检测其物质含量的试验都或多或少受到血液存放时间的影响。原因是全血存放时间越长，红细胞利用血清中的糖进行无氧酵解产生酸使NADH转化为NAD ，这样使测定结果假性升高。解决办法：①作好与临床的沟通，对抽血人员和标本运送人员(传递人员)进行培训；② 及时分离血清并及时检测；③ 也可将全自动生化分析仪上的延迟时间设置大于60秒，这样试剂在延迟期内消除酸的干扰，可完全避免假阳性结果的出现。
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Con A琼脂糖凝胶4B混成单一试剂的问题
比如酶法肌酐试剂，第一步R1中的酶要消除样品中内源性肌酸的干扰，如果混成单一试剂，则会使检测结果偏高，消除法HDL、LDL也不能混成单一试剂，因为它们都要分别清除HDL和LDL以外的脂蛋白，从而达到检测的目的，如果混成单一试剂，则会使测定的HDL和LDL不准确。另外，有的试剂混成单一试剂后，稳定性和抗干扰能力也会明显下降。解决办法：①在仪器通道或试剂位允许的情况下尽量使用双试剂；②如一定要使用单一试剂，最好选择试剂厂家针对部份项目专门生产好的单一试剂。
Con A琼脂糖凝胶4B试剂开瓶的问题:
随着全自动生化分析仪的普及，“开瓶稳定性”也随之受到了大家的重视，但是就目前有的试剂方法学来讲，还达不到人们所要求的试剂开瓶后在仪器内放很长时间不需要定标，比如ALP、TP、GSP等PH为碱性的试剂，开瓶后试剂会吸收空气中的二氧化碳，使试剂本身的PH值下降，如果长时间开瓶不定标或校准，会使检测结果发生偏离，在国外有的项目有明文规定，必须72小时之内定标，比如BUN。但是在国内的某些实验室为了方便，很长时间都不作校准，导致测定结果的不准确。解决办法：了解试剂的特性，及时对部份项目进行校准，对于每天标本量不多的医院，可按1～2天的用量取用试剂放入仪器。
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文献和实验PREPARATION OF PROTEIN A SEPHAROSE CL 4B BEADS
Swelling and Storage1.Resuspend .2 gm of beads (= 1.0 ml swelled bead volume)in 40 ml of distilled water.Let swell for at least 2 hours.2.Wash beads twice in (10 ml each wash).Spin in clinical or table top fuge.Do not exceed 2K rpm.3.Resuspend
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的影响，所以回收率并非是一成不变的。所以Qiagen以严谨的态度提供多种条件下的详细介绍：使用QIAquick回收之前和回收之后再混合的DNA 片段 (大小已指出) 。对所有尺寸的片段均获得了接近80％的回收率。A 1-5 : 回收之前; P : 回收之后再混合。样品使用 1.5% 琼脂糖凝胶分析(TAE buffer)。B 1-3: 回收之前; P : 回收之后混合。样品于 3.5% 高分辨琼脂糖凝胶上分析( TAE buffer)。M : pTZ-HinfI marker。记得《分子克隆II
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