DNA梯度分子量标准（10-200bp）

核酸电泳工作流程——5 大主要步骤

离 0.1-25 kb 范围内的核酸分子。聚丙烯酰胺形成的孔径较小，可用于分离小于1 kb 的核酸分子。某些情况下，可采用聚丙烯酰胺凝胶以获得片段小于 100 bp 的单碱基分辨率[1]。 表 1. 琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶之间的差异 2. 准备标准品和样品 a .核酸标准品选择 当运行凝胶时，含有已知大小的核酸参照样品通常被称为标准品、标记或分子量标准，用于目的样品大小的估计。在为给定样品选择合适的分子量标准时，需考虑如下因素: Ladde 类型（例如 DNA 或 RNA），片段结构(例如单链或双链

qPCR 实验中遇到这 3 个问题怎么办？

值偏大呢？首先需要计算引物的扩增效率。 可将基因的扩增产物进行梯度稀释（至少三个梯度，且梯度之间的 △CT 均一，防止因为操作原因导致标准曲线线性关系差，进而影响扩增效率的计算），同时进行 qPCR。将得到的标准曲线进行引物扩增效率的计算： 以 Vazyme #Q711 的荧光定量 Mix 扩增某基因为例： ① qPCR 扩增： 将 qPCR 产物进行原液、1 / 10、1 / 100 梯度稀释，每个梯度设置三个复孔，进行 qPCR 扩增，复孔间 CT 值取平均值，得到三组 CT 值。 ②

DNA的限制性酶切与琼脂糖电泳

。琼脂糖凝胶对DNA的分离范围较广，用各种浓度的琼脂糖凝胶可以分离长度为200bp至50kb的DNA。而分离小片段DNA(5~500bp)则需采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，其分辨力极高，能分离相差1bp的片段。 电泳过程中或电泳完毕直接利用低浓度的荧光染料EB(溴化乙啶)进行染色，EB是一种扁平分子，可以嵌入核酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出红色荧光。即可确定DNA条带在凝胶中的位置，而且灵敏度相当高，少至1~10ng的DNA条带即可直接在紫外灯下检出。 不同浓度琼脂