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上海抚生
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文献和实验(原料为谷类)、0.12g/L(原料为薯干及代用品)、杂醇油2.0g/L,结果还需换算为60度酒度再进行比较。GB5009.48-1985中有换算公式,而GB/T5009.48-1996中却没有此公式,按照它的步骤只能上报实际酒度时甲醇、杂醇油的浓度,而不是换算为60度酒度的浓度,造成“低度酒得益,高度酒吃亏”的现象。 2.关于定量依据问题 GB5009.48-1985中结果采用峰高定量,GB/T5009.48-1996一脉相承,一字不改。翻看常见的色谱方法,绝大多数定量
系统中克隆成功,包括蛋白酶、酶抑制剂、受体、单链抗体等(表1)。尽管各种外源蛋白质产生的水平不一,但各种蛋白质在甲醇酵母中的产生水平均为在细菌、昆虫或哺乳动物等表达系统中产量的10~100倍[2] 。如表皮生长因子(EGF)在酿酒酵母中的产量为7.4mg/L,而在甲醇酵母中为450mg/L,提高了60倍[3] 。椐报道,外源蛋白质在甲醇酵母中的产量最高可达12g/L[9] 。 表1 外源蛋白质在甲醇酵母中的高效产生
P.Pastoris表达载体及其元件由于甲醇营养型酵母菌体内无天然质粒,所以携带外源基因的重组体必须整合于染色体中才能实现外源基因的表达。整合表达的优点在于保持外源基因稳定性并可产生多拷贝基因。典型的毕赤氏酵母表达载体含有醇氧化酶基因的调控序列,主要的结构包括:5’AOX1启动子片段、多克隆位点(MCS)、转录终止和polyA形成基因序列(TT)、筛选标记(His4或 Zeocin)、3’AOX1基因片段,作为一个能在大肠杆菌中繁殖扩增的穿梭质粒,它还有部分pBR322质粒或COLE1序列
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