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6 x 500 mL
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文献和实验4 , 47.5 mg/L Na2 HPO4 , 调pH至7.2. HBSS一共分为四种,含钙镁,含酚红;含钙镁,不含酚红;不含钙镁,含酚红(D-Hanks );不含钙镁,不含酚红(D-Hanks)。此四种产品可根据客户需要自己选择。而如果客户无法判断应该选择哪一种,可以选不含钙镁,不含酚红(D-Hanks )。 Hanks’ 含钙镁 含酚红 Hanks’
M199 + 35g NaHCO3 + 25mM Hepes + 5 mM glutamine + 50 ug/ml Gentamycin.1M Hepes: 119.1 g Hepes + 500 ml dH2 O.Media A: 1X HBSS (10X:50ml) + 10 mM Hepes (1M: 5 ml) + 5 mM EDTA (0.5M: 5ml) + 2.5 % FBS (12.5 ml) in 500 ml.Media B: RPMI1640 470 ml + Gent
。 ●再一次在培养基中悬浮细胞,计数和接种细胞,进行培养。 (3)Dispase ●用无菌解剖刀和剪子把剩余组织切成3~4 mm小片,用不含钙镁的平衡盐溶液清洗组织碎片几次。 ●加入Dispase(0.6~2.4单位/ml 溶解在无钙镁的平衡盐溶液) ●在37℃孵育20分钟到几个小时。 ●通过无菌不锈钢丝网或尼龙网过滤细胞悬液,以分离分散细胞、组织碎片和较大的碎片。如果需要进一步的解聚,在碎片中加入新鲜的Dispase。 ●通过离心在平衡盐溶液中清洗悬液几次。 ●再一
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