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文献和实验人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南
的PluriSTEM®(SCM130)、Accutase(A6964)和DMEM/F12(D6421),以传代细胞。将试剂温热至室温。 2. 在细胞传代前一小时,将ROCK抑制剂(ROCKi)Y-27632(SCM075)加入到6孔板的每个孔中,终浓度为10 μM。 3. 1小时后,用解剖显微镜目视检查含有要传代的人多能细胞的平板。去除自发分化的区域。 4. 从孔的刮擦区域吸出含有细胞的培养基。用2 mL DMEM/F-12(D6421)培养基或1X PBS(D8537)冲洗每个孔。 5. 吸干净6孔板的每个孔
实验:通过 CCK-8 分析确定 TMT 在 Neuro-2a 细胞中的神经毒性。用 2μM、4μM 和 8μM TMT 处理细胞 24 小时分别导致细胞活力降低约 15%,31% 和 44%。 蛋白质组分析:确定了 8μM TMT 处理组和对照组的蛋白质表达谱。与对照组相比,TMT 组中共有 340 种差异蛋白,其中 204 种蛋白上调,136 种蛋白下调,进一步研究表明 TMT 破坏了自噬体的清除,导致它们在细胞质中的积累。IPA 显示出对 KIF5A 信号通路的抑制与自噬相关蛋白显著相关
试验程序 使用抗癌药物 (5-FU) 进行癌细胞死亡检测 将人肺腺癌 A549 细胞接种到多孔板上,从接种 24 小时后开始使用 5-FU (400 μM) 处理 72 小时,通过 CM20 系统每小时进行成像和细胞数计数。 设置用于药物处理的 5-FU 浓度,使细胞增殖和细胞死亡处于平衡状态,将未经 5-FU 药物处理的组设置为对照组。 传统方法用于通过 WST-8 检测,在药物处理开始后 0、24、48 和 72 小时测量细胞活力。 使用神经毒素 (6-OHDA) 进行细胞死亡检测
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