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文献和实验细胞实验避坑指南:0.22μm滤膜精准选型,告别污染与实验报废
预过滤,保护滤膜,全程低压过滤。过滤后建议做滤器完整性测试+支原体PCR复核。 2. 有机相(纯DMSO母液、无水乙醇等):支原体截留级0.1 μm疏水PTFE。可选型号少、通量低,极易堵膜,缓慢低压推滤,严禁高压。 限制:过滤仅降低支原体载量,不能100%保证清除;如果样品颗粒多反复堵膜,优先直接更换合格试剂 PART.04 实验室选型对照表 科研实验无小事,小小的滤膜选型,直接决定细胞
人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南
(SCM075) 添加到 7-10 mL 人 ES/iPS 细胞扩增培养基 (SCM130) 中,最终浓度为 10μM。 2. 用 ECM 凝胶 (CC131) 涂层 6 孔板。 3. 吸出培养基。用 2 mL 的 DMEM/F12 或 1X PBS 清洗孔。吸出 1 mL Accumax™ 溶液 (A7089) 并将其添加到孔中。在 37°C下孵育 5-6 分钟。手掌敲击板,以帮助解离细胞。 4. 向孔中加入 1 mL 单细胞传代培养基(来自步骤 1)。用 5 mL 移液器上下吹打 1-3 次以分离细胞
实验:通过 CCK-8 分析确定 TMT 在 Neuro-2a 细胞中的神经毒性。用 2μM、4μM 和 8μM TMT 处理细胞 24 小时分别导致细胞活力降低约 15%,31% 和 44%。 蛋白质组分析:确定了 8μM TMT 处理组和对照组的蛋白质表达谱。与对照组相比,TMT 组中共有 340 种差异蛋白,其中 204 种蛋白上调,136 种蛋白下调,进一步研究表明 TMT 破坏了自噬体的清除,导致它们在细胞质中的积累。IPA 显示出对 KIF5A 信号通路的抑制与自噬相关蛋白显著相关
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