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文献和实验Transwell侵袭实验怎么做?从基质胶铺板、接种条件到结果计数!
Transwell侵袭实验常用于评价肿瘤细胞等穿过细胞外基质屏障的能力。操作步骤看起来并不复杂,但基质胶铺板、细胞接种量、血清梯度和培养时间中任何一个条件没有控制好,都可能造成孔间差异过大、所有组都穿不过膜,或者膜下细胞多到无法准确计数。 因此,正式实验前最重要的不是直接照搬文献中的“1:8基质胶、1×10⁵个细胞、培养24 h”,而是先通过预实验确定一套适合当前细胞的实验窗口。 图 1丨 Transwell 侵袭实验操作流程示意图 一、迁移和侵袭实验的操作区别
基质胶是3D细胞培养、血管生成、侵袭迁移及体内成瘤等实验的核心耗材。不同研究方向对基质胶的机械性能、生长因子含量、蛋白浓度要求各不相同。本文汇总了翌圣基质胶在类器官培养、血管生成、细胞侵袭、体内成瘤四个方向的真实案例,供不同应用场景的研究者参考。 方向一:类器官培养 推荐货号:40192(类器官专用基质胶) 实验要点: 组织剪碎至1mm³,消化20-40min后过滤收集细胞,按100-1000个细胞/μL基质胶
【五分钟讲实验】类器官传代怎么做?别一上来就把基质胶圆顶吹烂
从孔底脱离。 在操作时注意不要一开始就用力吹碎,先完整回收。 三、机械破碎还是酶消化? 常规扩增可优先选择机械破碎,目标是得到大小相对均一的小团块; 在类器官较致密时,可考虑TrypLE消化,但时间不宜过长。 四、重新包埋怎么做? 离心后小心弃上清,加入预冷基质胶轻柔混匀,避免气泡; 点样时尽量形成饱满、完整的圆顶,凝胶后再沿孔壁缓慢加培养基。 五、传代后看什么? 24 h 内重点观察圆顶是否完整、类器官分布是否均匀
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