本试剂盒使用的逆转录酶ReverTra Ace
®属于在高温反应性和反应效率方面进行了提高的改良型M-MLV RTase(RNaseH
-),与以往的RTase相比,可以合成更长的cDNA(已确认到可以合成cDNA长度最长可达14kb)。
使用ReverTra Ace -α-
®以HeLa Total RNA(1μg)为模板,进行cDNA的合成后,使用各种PCR酶,以
β-actin(838bp)为目的片段进行PCR反应。cDNA合成反应是在20μl的反应体系中,42℃下反应20min.,接着99℃进行5min的失活处理。然后,向合成的cDNA反应液中加入80μl的PCR溶液,使总体系达100μl,进行PCR反应。
结果显示,所有的酶都确认有扩增,ReverTra Ace -α-
®的逆转录产物可适用于各种PCR酶的扩增反应。
1)Hatta M. et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 147-152 (2002)
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几点建议
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● PCR反应液的添加量
以Taq为基础的PCR酶以及KOD Dash的反应中最多可添加20%,KOD -Plus- 系列及KOD FX 系列的反应中最多可添加4%,推荐最好使用2%以下的逆转录反应液。
●模板RNA
Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各种RNA都可以使用。各种情况下使用高纯度的样品时,可以得到较好的结果。
●对照体系
样品在第一次进行RT-PCR时,推荐同时进行对照实验。本试剂盒的对照用G3PDH引物,可适用于human、mouse、rat及swine的对照使用,PCR产物长度0.45kb。
FAQ请点击这里。
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产品内容
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ReverTra Ace®100μl
5×RT Buffer*〔TRT-1B〕400μl
Random Primer〔FSK-301〕100μl
Oligo(dT)20 Primer 〔FSK-201〕100μl
10mM dNTPs〔NTP-301〕200μl
RNase Inhibitor100μl
RNase Free H2O1.2ml
*5×RT Buffer与ReverTra® Ace用的Buffer组分相同。
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基本反应条件
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〈cDNA合成〉
灭菌蒸馏水Xμl
模板RNA
100-1000ng total RNA
10-100ng mRNA
Primer
1μl Oligo(dT)20 Primer
1μl Random Primer
10pmoles* Specific Primer
5×RT Buffer4μl
10mM dNTPs2μl
ReverTra Ace®1μl
RNase Inhibitor1μl
Total Volume20μl
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几点建议
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● PCR反应液的添加量
以Taq为基础的PCR酶以及KOD Dash的反应中最多可添加20%,KOD -Plus- 系列及KOD FX 系列的反应中最多可添加4%,推荐最好使用2%以下的逆转录反应液。
●模板RNA
Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各种RNA都可以使用。各种情况下使用高纯度的样品时,可以得到较好的结果。
●对照体系
样品在第一次进行RT-PCR时,推荐同时进行对照实验。本试剂盒的对照用G3PDH引物,可适用于human、mouse、rat及swine的对照使用,PCR产物长度0.45kb。
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产品内容
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ReverTra Ace®100μl
5×RT Buffer*〔TRT-1B〕400μl
Random Primer〔FSK-301〕100μl
Oligo(dT)20 Primer 〔FSK-201〕100μl
10mM dNTPs〔NTP-301〕200μl
RNase Inhibitor100μl
RNase Free H2O1.2ml
*5×RT Buffer与ReverTra® Ace用的Buffer组分相同。
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基本反应条件
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〈cDNA合成〉
灭菌蒸馏水Xμl
模板RNA
100-1000ng total RNA
10-100ng mRNA
Primer
1μl Oligo(dT)20 Primer
1μl Random Primer
10pmoles* Specific Primer
5×RT Buffer4μl
10mM dNTPs2μl
ReverTra Ace®1μl
RNase Inhibitor1μl
Total Volume20μl
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几点建议
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● PCR反应液的添加量
以Taq为基础的PCR酶以及KOD Dash的反应中最多可添加20%,KOD -Plus- 系列及KOD FX 系列的反应中最多可添加4%,推荐最好使用2%以下的逆转录反应液。
●模板RNA
Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各种RNA都可以使用。各种情况下使用高纯度的样品时,可以得到较好的结果。
●对照体系
样品在第一次进行RT-PCR时,推荐同时进行对照实验。本试剂盒的对照用G3PDH引物,可适用于human、mouse、rat及swine的对照使用,PCR产物长度0.45kb。
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