Origami(DE3)感受态细胞, Origami(DE

 Origami(DE3)感受态细胞, Origami(DE3)pLacI感受态细胞, Origami(DE3)pLysS感受态细胞

产品编码	产品名称
YB04552	Origami(DE3)感受态细胞
YB04553	Origami(DE3)pLacI感受态细胞
YB04554	Origami(DE3)pLysS感受态细胞

 

>>>>>>>>>>>感受态细胞名称:Origami(DE3)<<<<<<<<<<

Origami（DE3）简介：

基因型：

 

Origami系列感受态细胞是K-12细胞的衍生而来，在thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变，这使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键，有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。研究表明使用Origami系列的感受态细胞表达获得的活性二硫键蛋白比其他同类感受态细胞要多10倍左右。

Origami系列感受态细胞能够用于氨苄抗性质粒的蛋白表达，尤其是和pET32a载体能够完美搭配使用。pET32a载体含有thioredoxin (TRX)融合标签，能够高效提升胞质内蛋白二硫键的形成。

TrxB和Gor基因突变使得质粒能够分别具有卡那和四环素抗性，所以本菌株无法用于卡那和四环素抗性质粒的蛋白表达。为了减少细胞内多种分子间的二硫键的形成，含有TrxB和Gor基因突变的宿主菌被建议用于含二硫键正确折叠 蛋白的高效表达。

DE3是溶源性的 λDE3, 所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。

生产的感受态细胞是采用氯化钙处理得到的感受态细胞，使用pUC19质粒检测，转化效率可达10⁷-10⁸，在-80℃下保存几个月转化效率不发生改变。

使用方法：
（1）取出感受态细胞，置于冰上5min，解冻。 
（2）然后将质粒加入感受态中（～100ul），轻弹感受态离心管底部，混匀，冰浴30分钟。 
（3）将离心管放入42℃水浴90秒后，迅速放于冰上。 
（4）每管中加500μl LB(SOC)培养基(不含抗生素)，37℃振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
（5）室温4,500rpm离心5分钟，弃去900μl上清后，用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到含Amp的LB琼脂平板或含X-gal、IPTG、Amp的LB琼脂平板表面。 
（6）将平板置于室温直至液体被吸收。 
（7）倒置平皿，于37℃培养，12~16小时后可出现菌落。

注意事项： 
1. 用此感受态进行转化需要热激，不能电转化，请勿分装。 
2. 感受态细胞应保存在 -80℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。 
3. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。 
4. 所有操作均需注意无菌操作。

 

>>>>>>>>>>>感受态细胞名称:Origami(DE3)pLacI<<<<<<<<<<

基因型:

 

pLacI基因型表明该菌株含有pACYC184质粒，该质粒含有Lac抑制子基因。

 

 

>>>>>>>>>>>感受态细胞名称:Origami(DE3)pLysS<<<<<<<<<<

基因型:

 

含有pLSs质粒，pLySs质粒能够产生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。