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- novoprotein
- E002-02B
- CN
- 2025年12月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Pfu DNA Polymerase
- 库存：
Pfu DNA Polymerase
- 供应商：
上海研卉生物
- 规格：
250U×5
目录号：E002-02B
产品描述:
本制品为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA聚合酶基因在大肠杆菌中进行表达后经多步纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3´→5´外切酶(校正)活性，当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围最广的高保真DNA聚合酶，其错误率仅为1.3×10-6，推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。
产品用途：
用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成，DNA片段的补平等。
使用建议：
Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3´端"A"突出，其PCR产物的克隆有几种方案。
1）PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平末端的载体中。
2）将产物3´末端加A后再与T载体连接。
3）引物中引入15bp与载体同源序列，利NovoRec® PCR产物一步定向无缝克隆试剂盒（Cat No:NR005）直接连接到目的载体。
由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3´→5´外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系，并最后加入Pfu DNA聚合酶。
保存温度：-20℃
注意事项：
1）2mM Mg2+可以满足绝大多数PCR扩增，对于某些PCR，为了保证较好的扩增，可调节为2-4mM。
2）体系中加入推荐的酶量，可以满足大多数PCR扩增，对于某些PCR，为了得到较好的扩增，可适当增加酶量。
应用实例：
图例）50μl扩增体系中，以5ngλDNA为模板，对500bp~6.0kb片段的扩增结果。
泳道1：0.5kb；泳道2：1.0kb；
泳道3：2.0kb；泳道4：3.0kb；
泳道5：4.0kb；泳道6：6.0kb；
泳道M：1kb DNA Ladder Plus II。
参考文献：
E2 ubiquitin-conjugating enzyme UBE2L6 promotes Senecavirus A proliferation by stabilizing the viral RNA polymerase[J]. Liang Li. et al. PLOS PATHOGENS. 2020.
For research use only.
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文献和实验We report a simple homogeneous fluorescence assay for quantification of DNA polymerase function in high throughput. The fluorescence signal is generated by the DNA polymerase triggering opening of a molecular beacon extension of the template
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The Polymerase Chain Reaction (PCR)
. Did He Really Invent PCR? • The basic principle of replicating a piece of DNA using two primers had already been described by Gobind Khorana in 1971:– Kleppe et al. (1971) J. Mol. Biol. 56, 341-346. • Progress was limited by primer synthesis and polymerase
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