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- YBscience
- YB00640
- 进口/国产
- 2025年12月01日
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- 库存：
大量
- 英文名：
X33酵母表达菌
- 保质期：
1-2年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1管
| 编号 | 名称 |
| YB00640 | X33酵母表达菌 |
名称：X33酵母表达菌
规格：300ul甘油菌
储存温度：-80℃
X33酵母表达菌株，X33酵母表达菌基因组：
野生型
X33酵母表达菌株，X33酵母表达菌简介：
X-33是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。毕赤酵母适宜的生长温度是28至30度，温度超过32度对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。X-33毕赤酵母可以在YPD培养基中生长。
X-33毕赤酵母被推荐用来表达含有Zeocin抗性的载体载体重组质粒，例如pPICZ A,B,C系列的载体。在筛选X-33重组转化菌株时，Zeocin抗生素的工作浓度是100 ug/ml。X33毕赤酵母含有AOX1基因，产生的转化株是Mut+基因型。
X33酵母表达菌株，X33酵母表达菌操作说明：
1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
X33酵母表达菌株，X33酵母表达菌
冷冻管开封：
用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌株复溶：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml 左右复溶液，加入到冷冻管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培养。细菌在30-35℃培养箱中培养24-48h，真菌在23-28℃培养箱中培养24-72h（必要时，可适当延长培养时间）。
X33酵母表达菌株，X33酵母表达菌
菌株传代：
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。
注意事项：
1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放置会导致菌种衰退；
2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；
3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能正常生长；
4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来电询问；
5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态；培养过程中亦要保持厌氧状态；
6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-10%CO2 促进生长；
7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。
8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。
保藏条件：
-20℃保存（复溶液于2-8℃保存）
X33酵母表达菌株，X33酵母表达菌保藏时间：
2-10 年，应根据菌种状况及时转接
X33酵母表达菌株，X33酵母表达菌
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- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
一，酵母表达系统毕赤酵母表达系统（invitrogen公司）：分泌型质粒pPIC9K，宿主菌毕赤酵母GS115分泌型质粒pPICZalpha （甲醇诱导）宿主菌毕赤酵母x33分泌型质粒pHIL-S1二，原核表达质粒表达宿主菌为BL21(DE3)系列带His标签（N端）：PET5-(a)氨苄抗性带His标签（N端）：PET28-(a)卡那抗性带His标签（C端）：PET24-(b)卡那抗性带His标签（C端）：PET21-(a)氨苄抗性带His标签（N端）+TrxA(硫氧还蛋白)：PET-32
经过不断的努力，终于得到酵母表达阳性结果。特把表达的一些心得写下来，希望对正在努力中的XDJM有所帮助，也以此感谢丁香园对我的帮助。分泌型载体：pPICZaC 宿主菌：X33 培养基：BMGY/BMMY 目的蛋白：20KD1、表达过程中防止污染是第一关键，酵母太容易污染 了。在用BMGY激活培养时，可进行挑单菌落培养24h,而不用常规的1％接种。摇床可定期用75％酒精喷洒消毒。2、如果只是检测用，用试管小量培养。先前用250ml的锥形瓶培养，既浪费材料，又耗费精力。目前表达出来的蛋白就是在试管
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