金龟子绿僵菌

金龟子绿僵菌
资源名称    金龟子绿僵菌
种属    Metarhizium anisopliae (Metschn.) Sorokīn
分离基物    金龟子
提供形式    斜面培养物
安全等级    1
模式菌株    no
培养方法
培养基    综合PDA：马铃薯煮汁1000mL，磷酸二氢钾 3g，硫酸镁 1.5g，葡萄糖 20g，维生素B1 10mg，琼脂 20g，pH自然。马铃薯煮液：200g马铃薯，去皮，切块，放入蒸馏水中煮沸30min，取滤液定容至1000mL,备用。121℃，15min。
生长条件    24℃，好氧。
生长特性    半知菌亚门、丛梗孢目、瘤座孢科、绿僵菌属，金龟子绿僵菌区别于白色绿僵菌和黄绿绿僵菌的主要. 形态特征是：产孢细胞为圆柱体或窄椭圆，分生孢子圆柱. 体；而白色绿僵菌与黄绿绿僵菌的形态特征为：产孢细胞棍帮形。
存储条件    定期移植法
详细说明
寄主名称    I-72杨
采集地    江苏句容
描述    在PDA平板培养基上（30℃、RH70%）菌落初为灰白色，后变为灰褐至褐黑色，培养基为黑色，日生长量为4.0cm；在全光条件下，15～20d产生黑色近球状子实体，子座表面附满菌丝。一个子座内有多个分生孢子器，近球形，180.0～318.9×157~436.0μm；孔口周?细胞深褐色，未成熟分生孢子单细胞、无色，为成熟孢子壁比成熟的分生孢子壁更厚，平均1.4μm；成熟的分生孢子双细胞褐色至黑色，表面有黑白相间的纵条纹，平均22.1×12.9μm；长宽比（L/W）为1.7～
收到菌株操作：
1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。
2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。
3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长
4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。
5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。
金龟子绿僵菌低温存法
①简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1～2个月，若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3～4个月；②液氮超低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至 -35℃时，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法长期保存。
金龟子绿僵菌脱水存法
①沙土保存法，能产孢子的细菌、放线菌及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合，经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2～3次，烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子，用无菌蒸馏水2～2.5ml制成孢子悬液，吸取少许加入沙土管中，经真空抽干，外观呈松散状态,于4℃冰箱保存，保存期可达5～7年。
② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管内于-20～-30℃的乙醇浴中速冻。然后，在低温下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存。保存期可达5～10年之久。
③ 石蜡油封存法，在斜面菌种培养物上,倒上灭菌后的石蜡油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低温干燥处保存，此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上。
金龟子绿僵菌特别注意事项
l、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;
2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染:
3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;
4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时与我公司联系或更换新的菌种。
使优良菌种的性状保持稳定，人为地创造条件，使菌种的新陈代谢活动处于不活泼状态，即选取优良菌种的休眠体（孢子或芽孢）或富有生命力的悬浮液在低温或脱水状态下保存。