多重PCR扩增试剂盒

特别提示：包括多重PCR扩增试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：多重PCR扩增试剂盒
英文名称：Multiplex PCR Kit
产品规格：50μl(100次)

  本试剂盒针对多重PCR的高产需求及DNA聚合酶的强聚合能力而优化，可在同一个PCR反应体系中，对多个基因使用多对引物同时进行特异性扩增（最多可加入10对引物）。当引物对较多时，可适当添加HotStart Taq DNA 聚合酶和dNTPs以达到良好的扩增效果。

产品用途：常规PCR鉴定、高产量PCR、高通量PCR、多重PCR。

试剂盒组成：

组份	体积
5×Multiplex PCR Buffer（5U/μl）	1ml
HotStart Taq DNA聚合酶（5U/μl）	100μl
dNTPs（10mM）	250μl

使用建议：
1、使用本制品时务必将Buffer反复混匀后再加，避免因组分不一导致结果差异；
2、配置和分装反应液时请一定使用新的（无污染的）枪头以避免污染；
3、如扩增条带多，可适当添加酶和dNTPs；
4、当多重 PCR扩增产物的长度均在1 kb以内时，使用 3%～4％浓度的 Agarose gel进行电泳分离效果最佳。

多重PCR引物设计注意事项：
1、尽量减小各引物间的 Tm 值差；
2、目的片段长度尽量在 1kb以下；
3、引物的长度保持在 22～30bp，GC含量在50～60%为宜，并避免局部区域GC或AT的含量过高；
4、引物应用于多重PCR前要预先对各目的基因进行扩增，以确认引物的特异性及反应性能。

应用实例：

图例一）50μl扩增体系中，以50ngλDNA为模板，对长度范围在100-800bp之间的片段的扩增结果。
泳道M：DL2000 DNA Marker；泳道1,泳道2：使用7对不同引物同时扩增的结果

常用反应体系(50μl)：

成分	体积
5×Multiplex PCR Buffer	10μl
上游引物*n	0.2-1.0μM（终浓度）
下游引物*n	0.2-1.0μM（终浓度）
模板	50ng
dNTPs	1.5μl
HotStart Taq DNA聚合酶	1μl
ddH2O	至50μl

常用PCR循环：

当扩增片段<3K：
94℃	5min
30次循环	94℃,20s 57℃,20秒 72℃,根据产物长度调整,1kb/min
72℃	5min
4℃	保温

常见问题及解答：
1、没有扩增产物或量少：保证每一管的引物，buffer，酶等已全部加入；使用高质量的引物，并检测引物是否降解；确认模板的质量及浓度；适度提高缺失（或低产）条带对应的引物用量；确保预混体系已混匀彻底；
2、存在非特异性扩增：检查单对引物的扩增性能与特异性；检查酶用量是否过多，酌情减少酶的用量；降低模板使用量；
3、电泳时条带模糊：检查引物是否出现质量问题，比如降解；减少起始模板量；降低电泳电压，更换新的电泳缓冲液。

储存条件：-20℃