超低分子量蛋白Marker IV(3.3～45kD)

特别提示：包括超低分子量蛋白Marker IV(3.3～45kD)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：超低分子量蛋白Marker IV(3.3～45kD)
产品规格：10T(50μl)

本产品包含2种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.3kD-45kD。可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。



使用说明：
第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用；本产品每次使用前，要95℃加热处理5分钟。

一. 制胶：
I 配制分离胶
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(19:1)、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置5-10分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
表一 (一块0.75mm mini胶用量)

	分离胶	浓缩胶
	18％T, 5%C /6.0ml	5％T, 3.3%C/2 ml
40% PAA(19:1)	2.7 ml	/
40% PAA (29:1)	/	0.25 ml
4×多肽电泳凝胶缓冲液	1.5 ml	0.5 ml
乙二醇(电泳级)	1.8 ml	/
ddH2O	/	1.25 ml
10％APS	50-65μl	20μl
TEMED	6μl	2μl

注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(29:1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2．加入10%过硫*(代"酸")铵和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
4．静置20-30分钟装待凝胶聚合

二. 电泳：
1. 取一管分装好的Marker样品，彻底融化，95℃加热处理5分钟，充分混匀后备用。
2. 电泳前，将10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的内外槽加入1×缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品(样品已经过2×Tricine上样缓冲液处理)加入点样孔，根据表二条件进行电泳，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。
注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽。
表二 多肽电泳条件

恒电压	150 V
起始电流	45-55 mA
结束电流	10-15 mA
电泳时间	2-3小时

三. 染色
根据常规实验步骤进行染色和观察。

储存条件：-20℃，有效期12个月。