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文献和实验的浓度。 4.抽提的质粒 DNA 电泳时怎么出现切口、断裂或降解现象? (1)使用的是收集后冷冻保藏的细菌。解决方法:使用新鲜培养的细菌。 (2)宿主菌富含核酸内切酶。解决方法:增加一步 Rinse A 洗涤步骤以彻底去除残留的核酸内切酶。或者将质粒 DNA 进行乙醇沉淀。 (3)质粒 DNA 在 Solution II 中暴露过久,易造成质粒 DNA 的切口断裂。裂解步骤控制在 5 分钟内完成。 (4)培养的细菌被杂菌污染。解决方法:重新挑取单菌落培养细菌。 5.抽提的质粒 DNA 电泳时怎么出现基因
如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
过程,无RNA损失。这就需要裂解液即可迅速裂解细胞,高效的保护RNA,又不会影响高效反转录反应,且对于后续荧光定量PCR无抑制作用。FastLine细胞到cDNA快速制备试剂盒(KR105,TIANGEN),一站式完成从细胞到cDNA的快速制备,同时去除基因组DNA残留,整个操作流程仅需50 min,获得的cDNA不但可以直接进行荧光定量 PCR还可以和正常提取RNA后进行第一链反转录后得到的cDNA一样,冷冻保存供以后使用,是从少量细胞快速制备cDNA的最佳选择,并可实现高通量检测。 图
和台面上残留的 DNA 和 RNA。 试剂组分的污染 按照标准 PCR 实验室的分区要求,在清洁度最高的「试剂储存和准备区」进行试剂的制备、分装和预混液的制备。大包装的 qPCR 试剂开封后进行分装,以减少反复冻融和吸取次数。在做多样本 PCR 反应时,先配制反应混合液分装至反应管中,最后加入样本核酸。避免同时开盖,实现完全闭管操作。实验试剂应与样品和 PCR 产物分开保存,不应放于同处。 前次 PCR 扩增产物和引物残余污染 标准的 PCR 实验室分区通过「标本制备区
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