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- 百奥莱博
- BTN130560-BCL
- 北京
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
348
- 英文名：
E.coli Rosetta-gami (DE3)pLys Chemical Competent Cell
- 保质期：
半年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
0.1mL*10
特别提示：包括大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞
英文名称：E.coli Rosetta-gami (DE3)pLys Chemical Competent Cell
产品货号：BTN130560
产品规格：0.1mL*10
Rosetta-gami(DE3)pLysS是Rosetta-gami(DE3)的的衍生菌株，用于具有毒性的含二硫键真核蛋白的表达。它是高度严紧表达宿主菌，包括Tunerlac 透性酶突变以及gor B/gor突变帮助细胞质内二硫键形成。
基因型：Δ(ara–leu)7697 Δ lac X74 Δ phoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F"[lac+lacIq pro](DE3)gor522::Tn10(TcR)gorB::kan plysS pRARE(CmR)
储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
我公司销售的大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验产物，使得表达产物量呈现IPTG浓度依赖性。（四环素敏感）在决定试用这些名字古怪的菌株时，有几个小Tips要注意的，一个是不同菌株有时已经携带某个质粒或者已经具有某种抗生素抗性，要注意自己的表达质粒是否能与之兼容。比如Rosetta 2 已经携带有氯霉素抗性质粒，不能再用氯霉素筛选等等。现象 可能原因 改进方案 建议菌株 无蛋白表达E. coli 的密码子偏移性补充稀有密码子的tRNA；将稀有密码子突变为普通大肠杆菌密码子Rosetta 2Rosetta-gami 2Rosetta-gami
改进方案 建议菌株 无蛋白表达 E. coli 的密码子偏移性 补充稀有密码子的tRNA；将稀有密码子突变为普通大肠杆菌密码子 Rosetta 2 Rosetta-gami 2 Rosetta-gami B RosettaBlue 出现截短蛋白 包涵体 二硫键形成困难 降低宿主胞质的还原性；利用促进二硫键形成的各种载体标签 Origami 2
21(DE3)融源菌则是添加T7聚合酶基因,为T7表达系统而设计. 真核细胞偏爱的密码子和原核系统有不同,因此,在用原核系统表达真核基因的时候,真核基因中的一些密码子对于原核细胞来说可能是稀有密码子,从而导致表达效率和表达水平很低.改造基因是比较麻烦的做法,Rosetta 2 系列就是更好的选择―― 这种携带pRARE2质粒的 BL21衍生菌,补充大肠杆菌 缺乏的七种(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA 及CGG)稀有密码子对应的 tRNA,提高外源基因、尤其是真核基因在原核系统
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