Western细胞裂解液

Western 实验步骤

样本准备 蛋白提取 所需仪器：匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF（蛋白酶抑制剂）、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子，消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液：PMSF=100：1。 1） 组织处理：首先用酒精棉消毒剪刀和镊子，取适量的组织于匀浆器中，用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。（含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆） 2） 细胞处理： A、 贴壁细胞处理：去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解

【求助】western

llh刘丽华 各位好：我做了1个多月western blot了，内参跑得还可以，但是目的蛋白总是跑不好，今天跑出来非特异性条带很清楚，而目的条带却很淡，不知是什么原因！前一次也是这种情况，我就延长封闭时间至2h，一抗1:700，二抗1:5000，请各位高手帮忙分析一下吧！下面是我的图片，最下面，模糊的一条（靠图片中间的一条）是我的目的条带！ coffeeshine 如果非特异带很清楚，延长封闭时间没作用

【求助】HER-2 western

xylish1 菜鸟一枚，目前要做HER-2（膜蛋白，185KD）western blot ，求教各位，一抗哪个公司的好？使用时抗体浓度，转膜时间及注意事项，多谢！ zhe992000 搭车求助，我想验证肿瘤组织中透明质酸（hyaluronan）的表达水平，这是一个糖蛋白，主要在细胞外基质中表达。在文献上一般是通过透明质酸合成酶的水平 或者透明质酸水解酶的水平来间接判断透明质酸的表达水平，我想直接测定透明质酸的表达量，不知