RIPA裂解液（蛋白裂解液）

RIPA裂解液配方

1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitorRIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g （1%）0.5M EDTA(pH8.0) 0.8mlNaF 41 mgNonidet P40 1 ml （1%）Aprotinin

细胞/组织裂解液

液）。③10000rpm，4℃离心10min，取上清转移至新管。④用考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度。⑤用裂解缓冲液将溶液浓度调到5mg/ml,每小瓶中放100μl，-80℃储存。⑥按照1:1体积比混合2×样品缓冲液，煮沸5min后，室温放置5min.⑦短时离心后点样电泳检测。B． 制备组织裂解液：①在制备过程中一直将溶胞液或组织放在冰上。②切开组织，称取组织1.5g于PBS中清洗。③在RIPA缓冲液中剪碎组织后，转移到匀浆器中，加足5ml RIPA缓冲液，研磨20min.④将研磨液转移到1.5ml的离心

组织裂解液选型与实操：从样本制备到蛋白提取

、作用特异性和下游应用兼容性上各有侧重。下表对比了几种常用的裂解液： 表：常见组织裂解液类型对比 裂解液类型 关键组分/特点 裂解强度 主要应用场景 注意事项 RIPA裂解液 Tris-HCl, NaCl, NP-40, 脱氧胆酸钠, SDS 强，可裂解核膜 全细胞及细胞核蛋白提取，常规WB、IP 可能使某些激酶等蛋白变性失活 NP-40裂解液 Tris-HCl, NaCl, NP-40（非离子去垢剂） 温和 膜蛋白的非变性溶解，细胞质可溶性蛋白提取 对细胞核和细胞骨架裂解不充分