miRNA测序

一、服务介绍 
microRNA(miRNA)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70—90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。microRNA通过和靶基因mRNA碱基配对引导沉默复合体（RISC）降解mRNA或抑制mRNA的翻译，从而在转录后水平调控蛋白表达（近期发现microRNA也能在转录水平调控基因表达）。microRNA在物种进化中相当保守，在动物、植物和真菌等中发现的microRNA表达均有严格的组织特异性和时序性。microRNA在细胞生长和发育过程中起多种作用，包括调控发育、分化、凋亡和增殖等。
目前研究microRNA的方法主要是realtime-PCR、生物芯片技术以及第二代测序技术。基于第二代测序技术的microRNA测序，可以一次获得数百万条microRNA序列，能够快速鉴定出不同组织、不同发育阶段、不同疾病状态下已知和未知的micoRNA及其表达差异，为研究microRNA对细胞进程的作用及其生物学影响提供了有力工具。
二、测序流程：
1. 样品RNA准备
2. 测序文库构建 
PAGE胶纯化特定大小的microRNA分子
连接5’RNA接头
连接3’RNA接头
逆转录反应获得cDNA测序文库
高保真聚合酶扩增构建的测序文库
3. DNA成簇（Cluster）扩增
4. 高通量测序（Illumina Genome Analyzer IIx）
5. 数据分析 
原始数据读取
使用公用microRNA数据库注释已知microRNA
深层次数据分析
三、样本要求：
1. 样品类型：细胞、新鲜组织或RNA样品。
2. 样品量：细胞样品请提供至少1×107个细胞，组织样品请提供至少300mg的组织块或切片，RNA样品请提供10 μg以上的总RNA。
3. 样品质量：RNA无明显降解，提取的总RNA OD260/280值在1.8~2.2之间，浓度≥ 500 ng/μl，28S:18S ≥ 1.5，RIN ≥ 7。
4. 样品保存：细胞样品或新鲜组织块（切成~50mg的小块）可用TRIZOL或RNA保护剂处理或液氮冻存后，-80℃保存。RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存。样品保存期间避免反复冻融。
5. 样品运输：样品置于1.5 ml管中，封口膜封好，干冰运输。
四、质量承诺
提供可靠数据和分析结果。
 


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