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苏丹III染色
苏丹Ⅲ是弱酸性染料,呈红色粉末状,易溶于脂肪和酒精(溶解度为0.15%)。脂肪和苏丹染液有比较强的亲和力,苏丹III适合用于生物脂肪材料的鉴定,苏丹Ⅲ 遇脂肪变橘黄色,可在光学显微镜下看到被染成橘黄色的小粒。
脂类包括的范围很广,有单纯脂、复合脂、衍生脂等。脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质,根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。很多细胞都含有脂肪,游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内,比较显著的如肝细胞。脂肪小滴可以集合,将细胞质及细胞核挤到一旁,如脂肪细胞。如果组织中脂肪过多,将会影响其正常功能,如脂肪肝。
脂肪不溶于水,易溶于浓乙醇、苯、氯仿等,因此制作脂类标本一般不用石蜡切片,而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类,固定多用甲醛类固定液。其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV、苏丹黑或者苏丹红等溶于脂类,而使脂类显色的原理显示脂类,使用时,要注意选择溶剂,要求既要溶解苏丹染料,又不溶掉脂肪。
苏丹染料是偶氮染料,它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
苏丹染料是一种脂溶性染料,易溶于乙醇但更易溶于脂肪,所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时,苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂肪结构中而使其显色。脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂,丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂,这样可以染色大的脂肪积累块,但是小的脂肪滴会溶解。60%异丙醇当溶剂,可以减轻脂类的溶解。丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质,但是能溶解染料,是比较理想的溶剂。用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀,防止蒸发,因蒸发会引起染料在材料中积累。常用相同溶剂洗掉多余的染料,然后再用水洗,可以防止多余的染料在材料中沉淀。
二、实验流程
1. 取材并固定。
2. 清洗。
3. 染色。
4. 显微镜观察并拍照。
三、服务说明及结果
1. 客户提供:样本。
2. 公司提供:图片,结果分析报告。
3. 实验周期:5-10个工作日。
【欢迎来电/邮件咨询】
联系人:刘经理
电话:021-54376058
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文献和实验乙醇苏丹黑 B 脂类染色法 苏丹染色法常用染料有苏丹黑B(Sudanblack-B)、苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ。这类染料均可使 中性脂肪着色。苏丹黑B为重氮染料,能使中性脂肪呈蓝黑色,显示磷脂效果最好;苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ为红色染料,后者比前者显色更强。 当组织切片置于染料时,苏丹黑B离开染液而溶于组织内的脂滴中,使组织内的脂类着色。由于苏丹黑B可与大多数脂类高度结合,故在组织化学上常用此法作为脂类存在的依据。此法常用?0%乙醇配制苏丹黑B的饱和液作为染剂,也可用?0%乙醇与丙酮各半
原理: 苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度,如果染料与含有脂类的试样接触,便有大量染料进入脂类物质的结构内,使这些结构呈红色。多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色,使脂质呈色。也可用四氧化锇染色,脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇而呈黑色。 配制试剂:1. 苏丹红Ⅲ染色液:将1g苏丹红Ⅲ溶于加温的70%乙醇溶液中过滤备用; 2. 甲醛钙固定液:将10ml甲醛和1g CaCl2 混合加水至100ml; 3. 甘油明胶:将12g明胶
可把脂类物质溶解,因此,用于脂类物质的首选固定液是甲醛,它可较好地保存脂类物质。2、试剂的配制:苏丹III0.2g,70%酒精50ml;苏丹IV0.5g丙酮50ml。3、操作步骤:(1)用经过甲醛固定过的组织作冰冻切片,厚约10-15um,切完后放入蒸馏水中,染色前放入50%-70%酒精洗。(2)入苏丹III IV染液染5分钟,(3)70%酒精分化,(4)水洗,(5)苏木素浅染细胞核,(6)水洗,必要时分化,(7)蓝化,如为漂浮染色,此时应将切片附贴于载片,(8)甘油明胶封固。结果:脂类物质呈现橘红
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