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- 2025年09月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温避光
- 保质期：
长期
- 英文名：
Glutathione, Oxydized
- 库存：
9999
- 供应商：
上海圻明生物
- 规格：
g
产品仅供科研，不用于临床。
MTT溶液的配制方法
通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。 需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.
配制MTT时用PBS（ph=7.4）溶解。PBS配方：Nacl 8g ＋ Kcl 0.2g ＋ Na2HPO4 1.44g ＋ KH2PO4 0.24g调pH 7.4,定容1L。
普通MTT法实验步骤：
1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.
2: 培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3：呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10min，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
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文献和实验GSH和GSSG 参照 Anderson等 （1992）。取0.5 g样品，加入3 mL冰冷的6%的偏磷酸（含1 mmol•L-1 EDTA ， pH 2.8），冰浴研磨，匀浆液以20,000 g，4 ℃离心15 min，取上清液来马上测定GSH和GSSG的含量或储存在-20 ℃下等待测定。总的GSH和GSSG含量测定如下：200 μL提取液加 1.2 mL反应液包含400 μL反应液1（110 mmol•L-1 Na2HPO4•7H20， 40 mmol•L-1 NaH2PO4•H2
58-66 （GILGFVFTL），人工合成9肽） （4）还原型谷胱甘肽，氧化型谷胱甘肽，100mM PMSF（苯甲磺酰氟） 2、设备 磁力搅拌器与搅拌棒 10℃水浴箱 1L烧杯 5ml注射器 1000μl加样器及吸头 【操作步骤】 （1） 预先在1升的烧杯中准备1升折叠缓冲液，内放一个磁力搅拌棒，置10℃水浴冷却。 （2） 向冷却的折叠缓冲液中加还原型谷胱甘肽至终浓度为5mM；再加氧化型谷胱甘肽至终浓度为0.5mM；加PMSF至终浓度为0.2
一种利用还原型 NAD（ P）将氧化型谷胱甘肽（ GS－ SG）催化反应成还原型（ GSH）的酶 EC． 1． 6． 4． 2。在动植物组织、微生物、酵母中均可以见到。反应是不可逆的。一经透析便会失活，通过添加 Mg2 或 M2 n 使之活化。鼠肝脏的酶几乎只能利用 NADP作为补酶，但是在人的红血球的酶也利用 NAD进行作用。对胱氨酸和高胱氨酸均无作用。可从酵母中制取结晶物。植物组织中似乎可对脱氢酶和氧化酶的连结起作用。将谷胱甘肽还原酶 GS－ SG、 NADP
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