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上图分别为A:人急性单核细胞白血病细胞 (THP-1);B:人胚肾细胞 (HEK293); C:原代新生大鼠心肌细胞 (NRCMs); D:原代成年大鼠心肌细胞(ARVMs); E:原代脐静脉内皮细胞(HUVEC)感染GFP-LC3质粒或者病毒后在荧光显微镜下拍摄的荧光照片,图中荧光小点指示自噬体!
百致生物自噬研究实例-自噬双荧光指示系统
上图为:原代脐静脉内皮细胞(primary HUVEC)感染mCherry-GFP-LC3腺病毒之后进行了不同的处理,感染24小时后,可以开始观察到GFP以及RFP表达,36-48小时可以进行细胞固定、封片(需要使用防淬灭的固定剂)、拍照分析。我们可以提供慢病毒、腺病毒、腺相关病毒载体供客户体内外实验需求,更多需求请联系我们技术人员!愿您实验顺利!
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文献和实验,对其中一个小室进行成像,然后用图像处理,得到图像上一个像素点对应的实际距离即可,但我觉得:计数板和培养瓶不在一个焦平面上,怎么能够以计数板作为标准呢?不知道大家平时是怎么得到这个scale bar的? yuhaibo:我是在拍完照片后,在电脑上用Microsoft photo editor打开照片,这个软件有标尺,单位有厘米,英寸,像素。记住你的拍照的放大倍数。根据测量的结果除以放大倍数就是细胞的直径了。 woowoocncn:我最近要做免疫组化的半定量分析,请问,用荧光二抗好呢,还是用普通二抗
:如果你将用的confocal microscope是载物台运动扫描(镜头在底下),则细胞必须是贴壁很牢的;如果是激光束运动扫描方式,则只要细胞能够沉淀在培养皿底部即可。注意培养皿底部要是很薄的玻璃片形式的。新手小猪:共聚焦显微镜可以让你清楚地看到细胞各个层面,所以有利于细胞内蛋白质以及细胞器的定位(当然,这些必须是经过标记你才能看到)。victor2002:观察普通免疫荧光(FIAT)的荧光显微镜可不可以用来观察细胞自发荧光吗?我用pEGFP质粒转染HepG2细胞,不知可不可以用观察普通免疫荧光的荧光显微镜观察?还是必须
激光共聚焦扫描显微镜 LCSM照片,蓝色为细胞核,绿色为微管,图片来自http://www.itg.uiuc.edu 激光共聚焦扫描显微镜(laser confocal scanning microscope)用激光作扫描光源,逐点、逐行、逐面快速扫描成像,扫描的激光与荧光收集共用一个物镜,物镜的焦点即扫描激光的聚焦点,也是瞬时成像的物点。由于激光束的波长较短,光束很细,所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力,大约是普通
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