Real-time RT-PCR MasterMix试剂盒

特别提示：包括Real-time RT-PCR MasterMix在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Real-time RT-PCR MasterMix
英文名称：SuperFastRT MasterMix(for Real-Time PCR)
产品规格：100次

  本品是专为Real-time RT-PCR而研发的快速逆转录试剂混合液。5×SuperQuick RT MasterMix中包含SuperFastRT逆转酶、RNase Inhibitor、Random 6 mers、Oligo dT Primer、dNTP、RT Buffer等从RNA模板逆转录成cDNA第一链所需的全部试剂。该产品的逆转录效率高，可对少量RNA模板进行良好的逆转录反应，15分钟即可完成荧光定量模板cDNA第一链合成。另外，逆转录反应温度可以提高到50℃，可通读GC含量高和二级结构复杂的RNA模板。本试剂盒操作十分方便快捷，仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应，特别适合于高通量检测。

产品组成：

组份	100次
5×SuperQuick RT MasterMix	200μl
RNase-Free Water	1ml

产品特点：
1、简便：即用型逆转录Mix，只需加入RNA模板和水，便可进行反应。
2、快速：15分钟完成cDNA第一链合成。
3、反转录效率高：反转录效率高于90%。
4、灵敏度高：pg级模板也可以得到高质量的cDNA。
5、通读复杂模板：GC含量高和二级结构复杂模板。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，使用专门的仪器和耗材。
2、逆转录体系配制在冰上进行操作，防止RNA发生降解。试剂盒的MasterMix使用后尽快置于-20℃保存，并尽量避免反复冻融。
3、反应体系可倍比放大，10μl反应体系可最大使用1μg总RNA。
4、对于二级结构复杂的RNA模板，建议在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5min立刻置于冰上，短暂离心后进行下一步操作。

操作步骤：
1、将模板RNA在冰上解冻；将试剂盒组分在室温解冻后立刻置于冰上，使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，并经短暂离心后使用。
2、根据以下表格配制反应体系(反应液配制请在冰上进行)，涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
 

试剂	10μl反应体系	终浓度
RNA Template	Xμl	1 pg～0.5μg
5×SuperQuick RT MasterMix	2μl	1×
RNase-Free Water	up to 10μl

注意：
1)如果总RNA量大于1μg，请按比例扩大反应体系。
2)5×SuperQuick RT MasterMix 中含有Oligo(dT)、Random primer、RNase Inhibitor、dNTP Mixture、RT Buffer等。

3、42℃孵育15分钟。
注意：对于二级结构复杂或GC含量高的模板，可以提高逆转录温度至50℃，增强逆转录效率。
4、85℃孵育5分钟，使逆转录酶失活。
5、短暂离心后置于冰上，再进行后续Real-time PCR检测，如果需要长时间保存，请置于-20℃。
注意：进行Real-time PCR反应时，逆转录产物的加量应不超过PCR反应总体积的1/10。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。