北京现货Real-time RT-PCR MasterMix

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名称：北京现货Real-time RT-PCR MasterMix怎么卖
编号：WE0130
规格：100次
英文名：SuperFastRT MasterMix(for Real-Time PCR)
品牌：百奥莱博
产地：北京
  本品是专为Real-time RT-PCR而研发的快速逆转录试剂混合液。5×SuperQuick RT MasterMix中包含SuperFastRT逆转酶、RNase Inhibitor、Random 6 mers、Oligo dT Primer、dNTP、RT Buffer等从RNA模板逆转录成cDNA第一链所需的全部试剂。该产品的逆转录效率高，可对少量RNA模板进行良好的逆转录反应，15分钟即可完成荧光定量模板cDNA第一链合成。另外，逆转录反应温度可以提高到50℃，可通读GC含量高和二级结构复杂的RNA模板。本试剂盒操作十分方便快捷，仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应，特别适合于高通量检测。

产品组成：

 

组份	100次
5×SuperQuick RT MasterMix	200μl
RNase-Free Water	1ml

产品特点：
1、简便：即用型逆转录Mix，只需加入RNA模板和水，便可进行反应。
2、快速：15分钟完成cDNA第一链合成。
3、反转录效率高：反转录效率高于90%。
4、灵敏度高：pg级模板也可以得到高质量的cDNA。
5、通读复杂模板：GC含量高和二级结构复杂模板。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，使用专门的仪器和耗材。
2、逆转录体系配制在冰上进行操作，防止RNA发生降解。试剂盒的MasterMix使用后尽快置于-20℃保存，并尽量避免反复冻融。
3、反应体系可倍比放大，10μl反应体系可最大使用1μg总RNA。
4、对于二级结构复杂的RNA模板，建议在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5min立刻置于冰上，短暂离心后进行下一步操作。

操作步骤：
1、将模板RNA在冰上解冻；将试剂盒组分在室温解冻后立刻置于冰上，使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，并经短暂离心后使用。
2、根据以下表格配制反应体系(反应液配制请在冰上进行)，涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
 

试剂	10μl反应体系	终浓度
RNA Template	Xμl	1 pg～0.5μg
5×SuperQuick RT MasterMix	2μl	1×
RNase-Free Water	up to 10μl

注意：
1)如果总RNA量大于1μg，请按比例扩大反应体系。
2)5×SuperQuick RT MasterMix 中含有Oligo(dT)、Random primer、RNase Inhibitor、dNTP Mixture、RT Buffer等。

3、42℃孵育15分钟。
注意：对于二级结构复杂或GC含量高的模板，可以提高逆转录温度至50℃，增强逆转录效率。
4、85℃孵育5分钟，使逆转录酶失活。
5、短暂离心后置于冰上，再进行后续Real-time PCR检测，如果需要长时间保存，请置于-20℃。
注意：进行Real-time PCR反应时，逆转录产物的加量应不超过PCR反应总体积的1/10。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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·2×Babuddy MasterMix(含染料)
编号：WE0110
英文名称：2×Babuddy MasterMix(With Dye)
规格：1ml|5ml
  本品是由Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase、PCRBuffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase是一种快速、高扩增效率的高保真DNA聚合酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和3"-5"外切核酸酶活性。经过改造的聚合酶其活性区域融合有一段聚合增强结构域，独特的结构极大提升了保真性和延伸速度。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase的保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，是普通Pfu的6倍。其延伸速率为15-30s/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷，大大缩短了反应时间。
  本品特别适合于在基因克隆实验中扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段时，优势更加明显，所扩增的片段最长可达20 kb。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。
  使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基，可直接克隆于平末端载体中。如需进行T/A克隆，需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高、保真性强的特点。适用于基因克隆、基因定点突变、SNP等实验。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。

产品特点：
1、高保真性：保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，普通Pfu的6倍。
2、扩增速度快：其延伸速率为15-30sec/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷。
3、特别适合于扩增长片段：扩增的片段长度可长达20kb。

产品组成：

组份	1ml	5ml
2×Babuddy MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意：2×Babuddy MasterMix含有Babuddy DNA Polymerase,2×PCR Buffer, 3 mM MgCl2和400μM dNTP mix。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	20μl反应体系	50μl反应体系	终浓度
2×Babuddy MasterMix	10μl	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Reverse Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Template DNA	适量	适量	<250ng
ddH2O	up to 20μl	up to 50μl

a．模板：在50μl PCR反应体系中，DNA模板的建议用量为低复杂度模板(如质粒DNA，λDNA等)1 pg- 10ng，高复杂模板(如基因组DNA)50-250ng。
b．引物：引物浓度请以终浓度0.2-1.0μM作为设定范围的参考，推荐终浓度为0.5μM。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件
常规三步法PCR反应：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
退火	45-72℃	10-30 s
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

a．变性：简单模板的预变性温度为98℃，预变性时间为30 s。对于比较复杂的模板，预变性时间可延长至3分钟。
b．退火：使用本产品时，退火温度设定的基本原则是，当引物长度小于或等于20 nt时，退火温度为引物最低的Tm；当引物长度大于20 nt时，退火温度应在最低Tm的基础上以Tm+3℃退火10-30 s。当无法得到理想的扩增效率时，应以最低的Tm值逐步提升至模板延伸温度。对于Tm高的引物可以使用两步法PCR。
c．延伸：本产品中所包含的Babuddy DNA Polymerase的扩增效率为2-4 kb/min，复杂性低的模板可用4 kb/min，复杂性高的基因组DNA模板，延伸时间则应为2 kb/min，对于一些cDNA模板，延伸时间可增加到1.5 kb/min。
d．循环次数：可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。

当引物的退火温度较高时，建议使用两步法进行PCR扩增：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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YT373 YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer) YT Taq DNA Polymerase
SV1633 SNAP-Surface 488
BTN60906 cDNA第一链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒) 1st-Strand cDNA Synthesis Kit
BTN131224 Helly固定液 Helly Fixative Solution
SY0084 GAS-Luc荧光素酶报告基因质粒 GAS luciferase reporter plasmid
HR0348 洗涤液(Western) Western cleaning solution
BTN100824 TB培养基 Terrific Broth Medium，Powder
SV0337 EcoNI限制性内切酶 EcoNI Restriction Endonuclease
SY0445 人源低密度脂蛋白 Human Low Density Lipoprotein (Human LDL)
KFS207 Caspase 9荧光法检测试剂盒(AFC) Caspase-9 Fluorescence Metric Assay
YT121 细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒(柱式吸附) DNA Ladder Extraction Kit with Spin Column
SV1178 Lambda DNA （不含 N6-甲基腺嘌呤）
BTN100303 柱式真菌DNA提取试剂盒(玻璃珠法) Fungus DNA Column extraction kit(Glass bead method)
WE0261 细菌蛋白抽提试剂盒 Bacterial Protein Extraction Kit
YT529 RNA寡核苷酸退火缓冲液 Annealing Buffer for RNA Oligos (5X)
ALH082 酵母质粒小量提取试剂盒 Yeast high purity plasmid small amount rapid extraction kit
BTN140387 酿酒酵母EGY48化学感受态细胞 E.coli EGY48 Chemical Competent Cell
YT273 双萤光素酶报告基因检测试剂盒 Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
SY0188 AR-GFP报告基因质粒 AR GFP Reporter Plasmid
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SV0642 RsrII限制性内切酶 RsrII Restriction Endonuclease
SY0552 Hoechst 33342
KFS310 端粒酶活性实时定量PCR法检测试剂盒(大鼠)
SV0082 BaeI限制性内切酶 BaeI Restriction Endonuclease
SV1430 Amylose 树脂 High Flow
BTN70503S DNA marker(200-5000bp) DNA ladder(200-5000bp)
YT026 TG1甘油菌 E.coli TG1
SV0987 rNTP 套装
HR0065 大肠杆菌蛋白提取试剂盒 E. coli protein extraction kit
BTN131074 SDS-PAGE样品预处理试剂盒 Sample Preparation Kit for SDS-PAGE
YT379 PCR试剂盒(含Taq酶，Buffer，dNTP，上样液) PCR Kit with Taq
SY0292 第一链cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(+gDNA wiper) First Strand cDNA Synthesis Super Mix for RT-qPCR(+gDNA wiper)
KFS064 WB抗体清除液(强碱性)
BTN131290 PLPD固定液 PLPD Fixative Solution
SY0089 c-Jun-Luc荧光素酶报告基因质粒 c-Jun luciferase reporter plasmid
BTN91103 非冻型拭子病毒保存液 Swab virus non-reezing preservation solution
WE0118 结核分枝杆菌基因分型试剂盒(VNTR-9) TB Typing Kit(VNTR-9)
SV0354 EcoRI-HF RE-Mix限制性内切酶 EcoRI-HF RE-Mix Restriction Endonuclease
SV1593 重组人源组蛋白 H10 Recombinant human protein H10
BTN120619 dGTP溶液(100mM) dGTP Solution(100mM)

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