尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)试剂盒

特别提示：包括尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)
英文名称：Uracil-N-Glycosylase(UNG)
产品规格：200U|1000U

  尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)也称为尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)，通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，该蛋白分子量为25kD，可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶，并且对RNA无活性，主要应用于防止PCR扩增产物的污染。该酶作用机理为：在PCR反应中以dUTP代替dTTP，扩增产物片段中的T全部被U取代，形成了含dU碱基的PCR扩增产物。UNG酶能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键，降解反应体系中含U的DNA，有效消除PCR产物的残留污染，大大降低扩增产物污染导致的假阳性，从而保证扩增的特异性和准确性。

活性定义：37℃，60分钟内催化1 nmol尿嘧啶，从含尿嘧啶的DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。

质量控制：SDS-PAGE检测纯度大于95%；经检测无核酸内、外切酶活性。

注意事项：
1、UNG长期储存(非频繁使用; 每月少于3次)请置于-70℃保存，每天或每周使用请于-20℃保存。尽量避免反复冻融，大包装建议分装使用。
2、UNG可以在PCR反应前先清除不慎污染的U-DNA分子，一个实验室必须在所有的PCR反应中使用dUTP作为dNTP之一，使所有扩增产物都成为U-DNA。如单使用于某个检测，T-DNA仍会积累，此抗污染系统也难以起到完全的作用。
3、UNG/dUTP系统是PCR试剂内部的一种防污染措施，为了防止PCR产物的污染，尤其是在临检实验室中反复放大同一片段时，必须严格规范实验室的划分和操作。

使用方法：
以下举例为Taq反应体系防止PCR产物污染的使用方法，实际应用可应根据具体实验进行改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
Taq PCR Buffer，10×	5μl	1×
dATP，10 mM	1μl	200μM
dGTP，10 mM	1μl	200μM
dCTP，10 mM	1μl	200μM
dTTP，10 mM	0.5μl	100μM
dUTP，10 mM	1μl	200μM
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	Xμl
Taq DNA Polymerase，5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
Uracil-N-Glycosylase，1 U/μl	0.2μl	0.2 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

2、反应条件

步骤	温度	时间	循环数
UNG消化	37℃-50℃	5-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	94℃	30 s	30-40个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	1 kb/min
终延伸	72℃	5 min

注意：通常将Taq酶与UNG酶按一定的比例加入PCR反应体系中，先于37℃-50℃范围内消化5-10分钟，然后95℃ 10分钟灭活，(同时这一步也达到预变性和热启动的效果)，随后进行PCR扩增。UNG酶的反应可以在37℃-50℃，5-10分钟的范围内变化，可以根据实验的需要进行调整。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。